Amélioration du diagnostic de la tuberculose pleurale à l’aide de la technique de sensibilité aux médicaments par observation microscopique

Nous avons comparé la culture MODS avec la culture Löwenstein-Jensen pour l’évaluation des spécimens pleuraux. La culture MODS était associée à une sensibilité diagnostique considérablement accrue et à un temps de diagnostic plus court, comparé à la culture de Löwenstein-Jensen. sensibilité de la culture des spécimens de biopsie, 81% contre 51%; délai de diagnostic, 11 jours contre 24 jours; P & 001 La technique MODS est peu coûteuse, permet des tests de sensibilité aux médicaments et constitue une méthode de diagnostic considérablement améliorée pour la tuberculose pleurale.

os de la tuberculose pleurale repose sur l’examen des échantillons de liquide pleural et / ou de biopsie par examen microscopique acid-rapide, culture, PCR, évaluation des caractéristiques du liquide pleural, et / ou examen histopathologique Cependant, ces méthodologies sont associées à une sensibilité insatisfaisante, spécificité, La culture MODS est une technique non exclusive récemment mise au point pour le diagnostic de la tuberculose qui, pour les échantillons d’expectoration, a démontré une détection plus rapide et plus sensible que l’étalon-or existant méthodes [6] Nous avons comparé la culture MODS avec la culture standard pour les patients suspects de tuberculose pleurale et avons émis l’hypothèse que la culture MODS améliorerait la sensibilité diagnostique et réduirait le délai de diagnosticPatients, matériels et méthodes Les participants ont été recrutés à l’Hôpital Nacional Dos de Mayo Lima, Pérou Les critères d’inclusion étaient l’âge> 16 ans et l’évidence radiographique du pleu épanchement qui a conduit le médecin à effectuer une thoracentèse et une biopsie pleurale Nous avons exclu les patients ayant des résultats positifs de l’examen microscopique Ziehl-Neelsen d’un échantillon d’expectoration, car ils ne nécessitaient pas de thoracentèse ou de biopsie pour le diagnostic de tuberculose pleurale. ont biaisé l’analyse de la validité Tous les sujets ont donné leur consentement éclairé, et l’étude a reçu l’approbation éthique locale et internationale. La thoracocentèse et la biopsie pleurale ont été réalisées en utilisant des méthodes standard par les médecins collaborateurs qui ont déterminé le volume et le nombre d’échantillons. le patient avait des échantillons de liquide pleural et de biopsie pleurale cultivés par chacune des techniques suivantes: 1 culture Löwenstein-Jensen directe, 2 cultures Löwenstein-Jensen décontaminées, 3 cultures MODS directes et 4 cultures MODS décontaminées. Chaque patient avait donc un total de 8 cultures diagnostiques réaliséesLe liquide pleural était concen Traités par centrifugation, et les surnageants ont été jetés, laissant 4 ml d’échantillon concentré, qui a été divisé en moitiés pour 1 culture directe et 2 décontamination, coloration à l’auramine, et la culture des échantillons de biopsie pleurale ont été divisés en moitiés pour 1 fixation dans 10% de formol, inclusion dans de la cire de paraffine pour le test de Ziehl-Neelsen, coloration à l’hématoxyline et à l’éosine et 2 homogénéisation avec un mortier de verre dans du sérum physiologique jusqu’à un volume de 4 mL pour coloration et acidification rapides. La décontamination a été effectuée avec un volume égal de 8 mg / mL On a ensuite dilué le mélange dans 10 ml de PBS, on l’a centrifugé et on l’a remis en suspension dans 2 ml d’albumine à 02%. Des cultures de tous les spécimens ont été effectuées en parallèle avec des cultures de négatifs. témoins Pour la culture de Löwenstein-Jensen, 200 μL d’échantillon ont été inoculés sur chaque pente, incubés à 37 ° C et examinés 2 fois par semaine. Les cultures MODS 7-60 ont été réalisées en utilisant 4 puits d’une plaque de 24 puits, comme criblé précédemment [6] Des échantillons de 500 μL ont été inoculés dans des puits contenant chacun 1 mL d’une solution de culture liquide milieu 7H9-Middlebrook; 10% d’acide oléique, d’albumine, de dextrose et de catalase; et polymixine [40 U / mL], l’amphotéricine B [4 μg / mL], l’acide nalidixique [16 μg / mL], le triméthoprime [4 μg / mL] et l’azlociline [4 μg / mL]. microscopie à lumière inversée 2-5 fois par semaine 4-60 Pour éviter la contamination croisée et l’exposition professionnelle, les plaques fermées ont été scellées dans des sacs en plastique ziplockStata, version 90 Stata, pour analyse. Les échantillons contaminés ont été considérés comme ayant des résultats de culture négatifs; Les taux ont été comparés par proportions en utilisant des tests z, et les temps de diagnostic ont été comparés en utilisant le test du log-rank. Résultats Cent onze participants ont satisfait aux critères d’inclusion et ont subi une thoracentèse et des échantillons de biopsie pleurale testés par Löwenstein-Jensen et les techniques de culture MODS Vingt-deux participants 20% ont été en mesure de fournir un échantillon d’expectoration; Soixante-treize pour cent des 111 participants satisfaisaient à la norme diagnostique de la tuberculose pleurale, définie comme étant des échantillons de liquide pleural et / ou de biopsie ayant donné des résultats positifs d’examen microscopique acido-résistant et / ou de culture. pour la tuberculose Tableau 1 Les participants atteints de tuberculose pleurale étaient significativement plus jeunes, 26 ans vs 47 ans; P & lt; 01 et plus susceptibles de signaler des symptômes constitutionnels, y compris la fièvre 73% vs 49%; P = 01, sueurs nocturnes 60% vs 34%; P = 01, et perte de poids 84% ​​vs 71%; P = 09 que ceux qui n’avaient pas de résultat positif à la tuberculose Un pourcentage plus élevé de tuberculeux que de patients sans tuberculose prouvée présentait une nécrose caséeuse sur culture de spécimens de biopsie pleurale 46% vs 13%; P & L 001 Dix pour cent des personnes n’ayant pas reçu de diagnostic de tuberculose ont reçu un diagnostic de néoplasie

Tableau 1View largeTélécharger les caractéristiques démographiques, les symptômes des patients et les résultats de culture des échantillons de biopsie chez les patients ayant reçu un diagnostic de tuberculose tuberculeuse pleurale, comparés aux patients n’ayant pas reçu de diagnostic de tuberculose pleurale, après biopsie pleurale et thoracentèse , les symptômes des patients et les résultats de la culture de spécimens de biopsie chez les patients ayant reçu un diagnostic de tuberculose tuberculeuse pleurale, comparés aux patients n’ayant pas reçu de diagnostic de tuberculose pleurale, après une biopsie pleurale et une thoracocentèse. La culture de MODS était significativement plus sensible que Löwenstein-Jensen. culture pour la culture directe des échantillons de biopsie sensibilité, 81% vs 51%; P <001, culture décontaminée des échantillons de biopsie sensibilité, 66% vs 43%; P = 007, et culture directe d'échantillons de liquide pleural 20% vs 71%; P = 027 culture MODS ont tendance à être plus sensible que la culture Löwenstein-Jensen de la sensibilité des échantillons de liquide pleural décontaminés, 14% vs 57%; P = 09 figure 1 La culture directe tendait à être plus sensible que la culture décontaminée, ce qui était statistiquement significatif pour la culture MODS des spécimens de biopsie 81% contre 67%; La sensibilité de l'examen microscopique de l'auramine était significativement plus grande pour les échantillons de biopsie pleurale que pour les échantillons de liquide pleural. La sensibilité de l'examen microscopique d'auramine des échantillons de biopsie pleurale était de 20% 14 des 70 examens microscopiques d'auramine des échantillons de biopsie. des échantillons de liquide pleural était 00% 0 de 70 examens microscopiques d'auramine des échantillons de liquide pleural ont donné des résultats positifs

Le dosage des échantillons de liquide pleural pour l’adénosine désaminase, le lysozyme et l’IFN-γ [2-5] repose sur des techniques de laboratoire spécialisées rarement disponibles dans les milieux pauvres en ressources et n’établit pas de sensibilité aux médicaments. La PCR peut déterminer le diagnostic et la pharmacosensibilité. a une sensibilité variable de 20% à 80% et est sujette à des résultats faussement positifs attribuables à une contamination croisée en laboratoire [2, 3, 8] Enfin, l’utilisation de systèmes de culture mycobactérienne automatisée permet des résultats relativement rapides et des tests de sensibilité aux médicaments myocarde. , mais la dépense limite l’utilisation de ces systèmes dans la plupart des régions d’endémicitéMODS culture est une technique de culture de laboratoire non exclusive pour la détection de M tuberculosis qui a été récemment développé au Pérou. Elle est plus sensible que les techniques standard pour évaluer les spécimens de biopsie pleurale. d’établir un diagnostic environ deux fois plus souvent que la culture Löwenstein-Jensen standard, vraisemblablement en raison de son utilisation de sensit La culture MODS fournit également un résultat plus opportun que la culture de Löwenstein-Jensen, ce qui réduit significativement le temps de résultats tant positifs que négatifs. La culture MODS permet également de déterminer simultanément les susceptibilités des médicaments Bien que nous n’effectuions pas de tests de médicaments la résistance aux tests de dépistage de la tuberculose dans cette étude, tous les échantillons ont été testés rétrospectivement pour la sensibilité aux médicaments par culture MODS; 71% des échantillons étaient multirésistants. Ceci est cohérent avec le taux de 9% de tuberculose multirésistante [10] et de 364 cas de tuberculose pour 100 000 habitants [11] dans les communautés locales de la communauté évaluées dans cette étude; ces taux sont parmi les plus élevés au monde dans les régions à faible prévalence d’infection par le VIH et sont beaucoup plus élevés que les taux nationaux péruviens. Les tests rapides de sensibilité aux médicaments sont cruciaux pour les personnes vivant avec le VIH [10] La culture MODS est similaire à la culture de Löwenstein-Jensen et est considérablement moins coûteuse que la culture mycobactérienne automatisée. Les défauts les plus notables de la culture MODS sont les exigences pour un microscope à lumière inversée et pour la formation en laboratoire pour reconnaître les Croissance des cordons mycobactériens Une autre préoccupation concerne la biosécurité en ce qui concerne la manipulation des cultures liquides infectieuses, bien qu’elles soient complètement scellées depuis leur installation jusqu’à la stérilisation en autoclave [6] Les limites de cette étude comprennent le nombre variable de biopsies effectuées pour chaque patient et la difficulté de définir un standard de diagnostic de la tuberculose Diag le rendement nostique augmente avec le nombre croissant d’échantillons de biopsie pleurale [12]; De plus, les échantillons ont dû être suffisamment dilués pour comparer les tests. En pratique clinique, l’utilisation d’une seule technique permettrait une culture sans dilution, augmentant ainsi la sensibilité. pour le diagnostic de la tuberculose est difficile Bien que nous n’ayons pas inclus la culture mycobactérienne automatisée comme test de comparaison, d’autres auteurs ont rapporté que la culture MODS a une sensibilité similaire [6] Des tests plus approfondis peuvent avoir défini un diagnostic pour une plus grande partie de la population étudiée. Nous avons défini l’étalon diagnostique de la tuberculose comme une confirmation de la présence de mycobactéries dans l’échantillon pleural par examen microscopique ou culture afin de garantir un taux élevé de tuberculose. spécificité, car les cas de caseating g Les ranulomes causés par des pathogènes non mycobactériens sont relativement fréquents au Pérou. Cependant, nous avons également réanalysé les données avec des critères diagnostiques moins stricts, réallouant les 5 patients atteints de nécrose caséeuse qui présentaient des résultats d’examen microscopique négatifs et des résultats de culture au groupe de tuberculose pleurale. dans la sensibilité légèrement diminuée pour toutes les techniques de culture mais aucun changement dans la sensibilité significativement plus élevée de la culture MODS, comparée à la sensibilité de culture de Löwenstein-Jensen pour la culture directe des échantillons de biopsie, 74% contre 44%; P = 003En résumé, nous rapportons que, comparé à la culture de Löwenstein-Jensen, la culture directe MODS des échantillons de biopsie pleurale a environ deux fois la sensibilité et fournit un diagnostic dans la moitié du temps Les cliniciens qui doivent diagnostiquer la tuberculose extrapulmonaire devraient envisager d’utiliser cette technique améliorer les capacités de diagnostic, en particulier dans les milieux pauvres en ressources, où la culture automatisée est peu susceptible d’être durable Ces améliorations des méthodes de diagnostic faciliteraient un traitement adéquat des patients atteints de tuberculose pleurale, diminuant potentiellement la morbidité et la mortalité associées à la maladie

Remerciements

Nous remercions le Dr Carlos Saavedra, le Dr Juan Sosa, le Dr Gina Aguillar et d’autres médecins de l’Hôpital Nacional Dos de Mayo pour leur aide inestimable dans le recrutement et la prise en charge des patients. Prix ​​de l’Agence des États-Unis pour le développement international contre la tuberculose HRN-5986-A-00-6006-00, Fogarty-National Institutes of Health Programme de formation sur le sida NIH 3T22-TW00016-05S3, NIH Formation internationale et recherche sur les maladies infectieuses émergentes 5D43-TW00910, National Institute de l’allergie et des maladies infectieuses 01637, Innovation pour la santé et le développement et innovation pour la santé et le développement Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits