Antigène Leucocytaire Humain-G: un marqueur pronostique prometteur de la progression de la maladie pour améliorer le contrôle de la trypanosomose humaine africaine

Contexte La trypanosomose humaine africaine causée par Trypanosoma brucei gambiense peut être diagnostiquée au stade hémolymphatique précoce [S] ou au stade méningoencéphalitique [S] Il est important de noter que les individus hébergeant des anticorps spécifiques et puissants contre les antigènes Tbg sont également diagnostiqués sur le terrain séropositif [SERO] Alors que certains développent la maladie dans les mois suivant leur diagnostic initial SERO / HAT, d’autres restent parasitologiquement négatifs pendant de longues périodes SERO et sont apparemment capables de contrôler l’infection antigène leucocytaire humain HLA-G, une molécule immunosuppressive, pourrait jouer un rôle critique. rôle dans cette variabilité de la progression entre l’infection et la maladie Méthodologies HLA-G soluble sHLA-G a été mesurée dans le plasma chez les patients du groupe SERO n =, SERO / HAT n =, ou HAT n = groupe et dans le liquide céphalorachidien chez les patients en S n = , début S n =, ou tard S n = Associations entre ces différents statuts et le niveau soluble ou les polymorphismes génétiques de HLA-G ont été explorésRésultats Plasma sHLA-G étaient significativement plus élevés dans HAT P = × – et SERO / HAT P = que SERO patients Aucune différence n’a été observée entre les groupes SERO / HAT et HAT Dans le groupe HAT, haplotypes spécifiques HG et HG Ces résultats suggèrent fortement l’implication de HLA-G dans la progression de la maladie HAT Il est important de noter que des taux plasmatiques élevés de sHLA-G chez les patients SERO pourraient être prédictifs d’un développement ultérieur de la maladie et pourraient représenter un marqueur sérologique. pour aider à guider la prise de décision thérapeutique D’autres études sont nécessaires pour évaluer la nature prédictive de HLA-G et pour estimer la sensibilité et la spécificité

HLA-G, trypanosomiase humaine africaine, Trypanosoma brucei gambiense, susceptibilité, association génétiquePlus de% de trypanosomiases africaines humaines Les cas de trypanosomiase à THA sont dus à Trypanosoma brucei gambiense L’infection chronique qui en résulte commence classiquement par un stade de stade hémolymphatique précoce [S], au cours duquel les trypanosomes prolifèrent dans le sang et la lymphe associés à des symptômes non spécifiques Ce stade est suivi d’un stade méningoencéphalitique [S], dans lequel le parasite envahit le système nerveux central SNC et provoque des troubles neurologiques Sans traitement, la THA a longtemps été considérée invariablement fatal; Des individus présentant des réponses élevées et répétées à la fois au test d’agglutination sur carte pour la trypanosomiase et au test spécifique de trypanolyse [T brucei gambiense] mais séronégatif parasitologiquement négatif restant [SERO] ont été rapportés [ ] Ces observations suggèrent que certains sujets peuvent contrôler la prolifération des trypanosomes sous-jacents à l’existence d’un phénomène de trypanotolérance / résistance humaine, comme le démontrent certaines races de taurine ouest-africaine et certains modèles de souris consanguines . Les résultats divergents peuvent également provenir de caractéristiques spécifiques du système immunitaire de l’hôte, impliquant différents profils de cytokines inflammatoires et de chimiokines dans le plasma et le LCR [, -] et des polymorphismes de gènes. codant des médiateurs inflammatoires [ Il a été rapporté que l’infection par T. brucei réduisait la lymphopoïèse B, compromettant la compétence immunitaire humorale de l’hôte et les réponses mémoire induites par le vaccin Au total, ces observations suggèrent que les molécules régulant l’immunité jouent un rôle important dans la progression de la maladie. Le gène G code une molécule immunomodulatrice qui est un ligand connu pour les récepteurs inhibiteurs présents à la surface des cellules immunitaires des réponses innée et adaptative HLA-G joue un rôle crucial durant la grossesse dans la tolérance materno-fœtale. Les conditions pathologiques peuvent être utiles ou préjudiciables Up-régulation de HLA-G a été observée dans le LCR dans les troubles inflammatoires du SNC Cependant, l’implication de HLA-G dans les infections parasitaires tropicales n’a pas encore été étudiée largement. entre les niveaux solubles de HLA-G sHLA-G et le risque de paludisme a été décrit dans Une association génétique entre les polymorphismes à l’HLA-G ‘u On a également démontré la présence de HLA-G dans la susceptibilité au HAT . La présente étude a été conçue pour étudier plus avant le rôle du HLA-G, tant au niveau protéique que génétique, au début et à la progression de la maladie de la THA

Méthodes

Population étudiée et définition du phénotype

L’étude s’est déroulée dans des foyers proches de THA Dubreka, Boffa et Forecariah situés dans les zones de mangrove de la côte guinéenne. Tous les sujets ont été identifiés entre novembre et mai, selon les politiques de l’Organisation Mondiale de la Santé et NCP. ont été classés selon les résultats des tests sérologiques et parasitologiques voir Méthodes supplémentaires, comme suit: le groupe séropositif SERO; n = personnes incluses avec résultats positifs du test d’agglutination sur carte pour le titre final de trypanosomiase ou plus et le test de trypanolyse et les résultats parasitologiques négatifs, dans des échantillons de sang total ou de liquide lymphatique au diagnostic initial et de façon répétée pendant un an; le groupe SERO / HAT n = inclus les personnes séropositives dont les résultats des tests parasitologiques sont devenus positifs au cours du suivi; et le groupe HAT incluait des patients avec des résultats sérologiques et parasitologiques positifs. Le groupe HAT a été subdivisé en plusieurs étapes après l’examen du LCR, comme suit: S n = numération leucocytaire [- WBC] – / μL et aucune détection de trypanosome; début S SE; n = nombre de globules blancs – / μL avec ou sans détection des trypanosomes ou ≤ / μL avec détection des trypanosomes; et S SL tardif; n = nombre de leucocytes & gt; / μL, avec ou sans trypanosomes dans le LCR Tableau Les patients des groupes HAT et SERO / HAT ont été traités selon les recommandations du NCP L’échantillon de l’étude est décrit dans Tableau Les individus des foyers ont été inclus. autres et similaires en termes d’environnement, la répartition de la maladie et des rapports âge-sexe varie selon les foyers dus aux différences d’exposition humaine aux glossines et à l’intensité de la transmission Les foyers sont très similaires en terme d’exposition microbienne , la lèpre et le choléra restent présents et sont très endémiques pour le paludisme

Tableau Caractéristiques des participants à l’étude Sexe groupe phénotypique% d’âge, moyenne SEM, concentration y,% a temps d’exposition, moyenne SEM, yb sHLA-G dans le plasma, moyenne SEM, ng / mL sHLA-G dans le LCR, moyenne SEM, ng / mL de données génétiques disponibles, non SERO n = femelle:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = NA SERO / HAT n = Femme:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = NA HAT n = c Femelle: mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = S n = femelle: mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forecariah: n = n = n = S n = d femelle:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = SE n = femelle: mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = SL n = femelle:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = Tous n = Femme:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = Groupe phénotypique% d’âge, moyenne SEM, y Focus,% a Temps d’exposition, moyenne SEM, yb sHLA-G dans le plasma, moyenne SEM, ng / mL sHLA-G dans le LCR, moyenne SEM , ng / mL Données génétiques disponibles, non SERO n = femelle:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = NA SERO / HAT n = Femme:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = NA HAT n = c Femelle: mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = S n = femelle: mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forecariah: n = n = n = S n = d femelle:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = SE n = femelle: mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = SL n = femelle:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forécariah: n = n = n = Tous n = Femme:; mâle: n = Boffa:; Dubreka:; Forecariah: n = n = n = Abréviations: CSF, liquide céphalo-rachidien; THA, trypanosomose humaine africaine; NA, non disponible; S, scène; S, scène; SE, début S; SL, fin de S; SEM, erreur type de la moyenne; SERO, séropositif; sHLA-G, l’antigène leucocytaire humain soluble dans les mangroves Ga Three HAT en Guinée littorale ont été considérés pour cette étudeb Le temps de résidence a été défini comme le temps passé par l’individu dans le foyer HAT avant le stade indéterminé S ou S pour les patients avec HAT et CSF sHLA -G niveaux pour les sujets qui ont développé la THA, mais ont été déterminées pour être SERO au premier diagnostic ont été ajoutés dans le groupe HAT Deux patients dans le groupe HAT S avaient un phénotype S indéterminé S précoce ou tard

Quantification de sHLA-G

Le niveau de sHLA-G dans les échantillons de plasma et de liquide céphalo-rachidien a été quantifié en utilisant une méthode validée de dosage immuno-enzymatique avec MEM-G / , qui reconnaît les isoformes solubles les plus abondants et les HLA-G solubles et anti-humains. -microglobuline comme anticorps de capture et de détection, voir respectivement Méthodes supplémentaires

Découverte de variations de nucléotides uniques

La variation des séquences nucléotidiques HLA-G a été évaluée chez des guinéens non apparentés et sains provenant du même groupe ethnique. Le fragment de paire A-base a été séquencé, incluant tous les variants connus pour le contrôle transcriptionnel et post-transcriptionnel de l’expression HLA-G. sites variables, y compris les variations de SNV uniques et les insertions / délétions indels, ont été identifiés Tableau supplémentaire Toutes ces variantes ont déjà été rapportées dans des études antérieures

Marquage et génotypage

Le programme Tagger mis en œuvre dans Haploview a été utilisé pour sélectionner le sous-ensemble de marqueurs qui ont efficacement étiqueté toutes les variations HLA-G courantes fréquence allélique mineure, ≥ dans l’échantillon de Guinéens r ≥ Un sous-ensemble de marqueurs a été sélectionné avec un r moyen entre Ils ont été génotypés chez des individus de la cohorte HAT utilisant la plateforme de génomique fonctionnelle de la technologie Sequenom MassARRAY, Bordeaux, France Les fréquences génotypiques observées sur des sites variables rs, rs, rs, rs et rs n’étaient pas conformes aux hypothèses d’équilibre de Hardy-Weinberg P = × – × – et ont donc été retirés des analyses subséquentes Les données de génotype des marqueurs restants ont ensuite été utilisées pour imputer les génotypes manquants pour tous les variants HLA-G préalablement identifiés par séquençage, comme décrit ci-dessous.

Imputation du génotype

Les données génotypiques des variants HLA-G non génotypés chez les individus de la cohorte HAT ont été imputées à l’aide de MACH avec paramètres par défaut. Les haplotypes HLA-G des Guineans sains non apparentés et du panel Génome africain ont été utilisés comme haplotypes de référence du génotype procédure d’imputation voir Méthodes supplémentaires pour une description de la reconstruction de l’haplotype et de l’imputation du génotype. Des scores de très haute qualité signifient [écart-type], et r valeurs pour les sites variables, considéré de qualité suffisante pour être inclus analyse d’association génétique, avec les marqueurs génotypés

Analyses statistiques

sHLA-G a été utilisé à la fois comme une variable quantitative et catégorique faible, moyenne ou élevée, basée sur les tertiles de la distribution. Nous avons utilisé la régression logistique multiple pour comparer la probabilité de différents groupes de résultats ou stades selon le niveau de sHLA-G et autres variables explicatives âge, sexe, foyer, temps d’exposition et polymorphismes génétiques Lorsque les groupes SERO, SERO / HAT, HAT ou stades S, SE, SL ont été utilisés comme résultats, des régressions logistiques multinomiales ont été effectuées. Cependant, lorsque la variable de résultat était dichotomique S vs S, une régression logistique binomiale a été appliquée Lorsque le niveau sHLA-G a été utilisé quantitativement comme variable dépendante ou résultat, une régression linéaire a été appliquée Une régression logistique multiple et une régression linéaire ont été effectuées pour comparer le niveau sHLA-G et le statut parasitologique avec les autres variables explicatives , sexe, concentration, durée d’exposition Des tests d’association de marqueurs simples et d’haplotypes ont été réalisés sous un modèle additif. ajusté sur le sexe, l’âge en années, les foyers HAT Boffa, Dubreka et Forecariah et le temps d’exposition en années Tableau Toutes les variables ont été introduites initialement dans le modèle multivarié Le modèle final a été sélectionné par une procédure rétrograde, et seulement covariables avec une valeur P ; ont été retenus

RÉSULTATS

Niveau de plasma sHLA-G selon le groupe HAT et le stade

La population étudiée et les niveaux de sHLA-G sont entièrement décrits dans le tableau Des taux significativement plus élevés de sHLA-G plasmatique ont été observés dans les groupes HAT P = × – et SERO / HAT P = que dans le groupe SERO. Figure B Afin d’évaluer la valeur pronostique des niveaux HLA-G dans la progression de la THA, une régression logistique multinomiale a été effectuée, y compris les covariables d’âge et de concentration. Tableau Les individus avec des niveaux sHLA-G moyens ou élevés présentaient un risque plus élevé de un odd ratio de diagnostic de THA [OR], [P =] et [P = × -], respectivement, que ceux avec de faibles niveaux de sHLA-G Tableau En outre, les sujets séropositifs avec un niveau élevé de sHLA-G ont presque HAT SERO / HAT que les individus qui n’ont pas développé la maladie SERO OU,; P = Tableau Les mêmes schémas de résultats ont été observés lorsque sHLA-G était utilisé comme variable quantitative. Des niveaux élevés de sHLA-G étaient également significativement associés à la présence de parasites dans le plasma. % intervalle de confiance [CI], -; P = × -, bien que les nombres de parasites n’influencent pas le niveau de sHLA-G Figure C L’âge et le foyer étaient également associés à des données sur l’état parasitologique non montrées

Tableau Association entre le groupe africain de la trypanosomose humaine et le niveau antigène-G soluble leucocytaire humain en comparaison plasmatique OU SEa% CI P Valeur HAT vs SERO sHLA-G dans la catégorie plasmatique bas … … … Moyen – c Élevé – × -c Âge – c Focus Boffa … … … Dubreka – Forecariah – Sexe … … NS Temps d’exposition … … NS SERO / HAT vs SERO sHLA-G dans le plasma catégorique Faible … … … Medium – High – c Age Boffa … … … Dubreka – Forecariah – c Sexe … … NS Temps d’exposition … … NS HAT vs SERO / HAT sHLA-G dans le plasma catégorique Faible … … … Medium – High-Age – Focus Boffa … … … Dubreka – Forec ariah – c Sexe … … NS Temps d’exposition … … NS Comparaison OU SEa% CI P Valeur HAT vs SERO sHLA-G dans le plasma categoricalb Faible … … … Moyen – c Élevé – × -c Âge – c Foyer Boffa … … … Dubreka – Forecariah – Sexe … … NS Temps d’exposition … … NS SERO / HAT vs SERO sHLA-G dans le plasma catégorique Faible … … … Moyen – Elevé – c Age Boffa … … … Dubreka – Forecariah – c Sexe … … NS Temps d’exposition … … NS HAT vs SERO / HAT sHLA-G dans le plasma catégorique Faible … … … Medium – High-Age – Focus Boffa … … … Dubreka – Forecariah – c Sexe … … NS E xposure time … … NS Abréviations: CI, intervalle de confiance; THA, trypanosomose humaine africaine; NS, non significatif; OU, odds ratio; SE, erreur standard; SERO, séropositif; sHLA-G, antigène leucocytaire humain soluble-Ga régression logistique multinomiale a été appliquée pour étudier l’association entre les variables explicatives groupes sHLA-G dans le plasma, sexe, âge, foyer HAT, et le temps d’exposition et le statut de la maladie HAT SERO, SERO / HAT, et groupes HATb Les niveaux moyens et élevés de sHLA-G et ng / mL, respectivement, ont été comparés à de faibles niveaux – ng / mL, le groupe de référence c Significant at P & lt; Voir grand

Figure View largeTélécharger la lamePlasma et liquide céphalo-rachidien Profils HLA-G sHLA-G solubles dans le LCR par trypanosomose humaine africaine Stade HAT et statut parasitologique A, taux plasmatiques dans les groupes SERO, SERO / HAT et HAT séropositifs B, niveaux plasmatiques au stade S, stade précoce SE, et groupes SL à un stade tardif C Niveaux plasmatiques dans différentes classes de nombres de parasites D, niveaux de CSF dans les groupes S, SE et SL E, niveaux de CSF dans le groupe de détection trypanosome négatif et positif * P & lt; ; † P & lt; Valeurs P basées sur la régression logistique multinomiale pour les associations entre variables explicatives [niveau sHLA-G, sexe, âge, THA, foyer et temps d’exposition] et groupe HAT ou régression par étapes et linéaires pour l’analyse des associations entre variables explicatives [statut parasitaire ou parasite numération dans le plasma ou le liquide céphalorachidien, sexe, âge, THA, foyers et temps d’exposition] et niveau de sHLA-G avec transformation logarithmique Abréviations: NS, non significatif; Trypanosoma brucei gambienseFigure View largeTélécharger la lamePlasma et liquide céphalo-rachidien CSF HLA-G profils solubles sHLA-G par trypanosomose humaine africaine Stade HAT et statut parasitologique A, Niveaux plasmatiques chez les groupes SERO, SERO / HAT et HAT séropositifs B, niveaux plasmatiques au stade S, au stade précoce SE et au stade tardif SL groupes C Niveaux plasmatiques dans différentes classes de nombres de parasites D, niveaux de CSF dans les groupes S, SE et SL E, niveaux de CSF dans le groupe de détection trypanosome négatif et positif * P & lt; ; † P & lt; Valeurs P basées sur la régression logistique multinomiale pour les associations entre variables explicatives [niveau sHLA-G, sexe, âge, THA, foyer et temps d’exposition] et groupe HAT ou régression par étapes et linéaires pour l’analyse des associations entre variables explicatives [statut parasitaire ou parasite numération dans le plasma ou le liquide céphalorachidien, sexe, âge, THA, foyers et temps d’exposition] et niveau de sHLA-G avec transformation logarithmique Abréviations: NS, non significatif; T brucei gambiense, Trypanosoma brucei gambiense

Niveau sHLA-G dans le liquide céphalorachidien selon le stade HAT

Il n’y avait pas de différence significative entre les niveaux sHLA-G du CSF entre S et S Tableau, Figure D, et les données non montrées Aucune association significative entre sHLA-G et la probabilité d’être diagnostiqué dans SL n’a été observée lorsque sHLA-G a été utilisé comme catégorique données variables non présentées Cependant, chez les patients du sous-groupe S, des taux élevés de sHLA-G dans le LCR étaient associés à une probabilité plus élevée de développer une maladie SL OU; P = quand sHLA-G a été utilisé comme variable quantitative En revanche, les niveaux de CSH de sHLA-G dans S n’étaient pas associés à la probabilité de développer SE OU; P = ou SL OU,; P = maladie Tableau Le sexe et le foyer de THA étaient également associés au stade de la maladie. Tableau Des taux élevés de sHLA-G étaient significativement associés à la présence de parasites indépendamment du nombre de cellules. % CI, -; P = Figure E Le sexe était également associé à des données sur l’état parasitologique non montrées

Tableau Association entre stade de la trypanosomiase humaine africaine et niveau antigène-G leucocytaire humain soluble dans la comparaison des fluides cérébro-spinaux OU SEa% CI P Valeur SE vs S sHLA-G dans le CSF continu – Sex – b Focus Boffa … … … Dubreka – b Forecariah – Age … … NS Temps d’exposition … … NS SL vs S sHLA-G dans CSF continu – Sex – Focus Boffa … … … Dubreka – × -b Forécariah – b Âge … … NS Temps d’exposition … … NS SL vs SE sHLA-G dans CSF continu – b Sexe – × -b Focus Boffa … … … Dubreka – Forécariah – Âge … … NS Temps d’exposition … … NS Comparaison OU SEa% CI P Valeur SE vs S sHLA-G dans CSF continu – Sexe – b Focus Boffa … … … Dubreka – b Forecariah – Âge … … NS Temps d’exposition … … NS SL vs S sHLA-G dans CSF continue – Sexe – Focus Boffa … … … Dubreka – × -b Forécariah – b Âge … … NS Temps d’exposition … … NS SL vs SE sHLA-G dans CSF continu – b Sexe – × -b Focus Boffa … … … Dubreka – Forecariah – Âge … … NS Temps d’exposition … … NS Abréviations: CI, intervalle de confiance; LCR, liquide céphalo-rachidien; THA, trypanosomose humaine africaine; NS, non significatif; OU, odds ratio; S, scène; SE, stade précoce; SL, stade avancé; SE, erreur standard; sHLA-G, antigène leucocytaire humain soluble Ga La régression logistique multinomiale a été appliquée pour étudier l’association entre les variables explicatives sHLA-G dans le LCR, le sexe, l’âge, les foyers de THA et le temps d’exposition et les stades des groupes de S, SE et SL Significatif à P & lt; Voir grand

HLA-G Polymorphisme et Haplotype Association selon HAT Groupe et Stade

Vingt marqueurs de marqueurs HLA-G SNV, indels ont été génotypés chez des individus de la cohorte HAT En outre, les données de génotype de variants supplémentaires ont été imputées avec une précision suffisamment élevée r & gt; chez les mêmes individus sur la base des données de séquençage d’un panel de référence comprenant des Guinéens sains non apparentés et d’autres Africains du panel Génome voir Méthodes Supplémentaires Globalement, les variants SNV, indels ont été testés pour leur association avec le statut HAT et le stade les analyses n’ont révélé aucune association significative avec le groupe HAT ou le stade après la correction pour les tests multiples P & lt; données non montrées Un déséquilibre de liaison important et significatif a été observé dans les variants testés, qui ont tous été inclus dans un seul bloc de déséquilibre de liaison fort englobant l’ensemble du gène HLA-G Figure supplémentaire Un total d’haplotypes étendus en amont des régions régulatrices, codantes et non traduites reconstruit dans l’échantillon de l’étude, avec survenant à une fréquence supérieure à% Tableau; Tableaux supplémentaires – Aucune association significative n’a été observée entre ces différents haplotypes et groupes HAT SERO, HAT et stades S, SE, SL après correction pour tests multiples Seuil de significativité corrigé par Bonferroni, P = données non montrées

Tableau Haplotypes Leucocytaires Humains-G, Haplotypes étendus, Structure De Lignée Et Fréquences Dans L’échantillon Guinéen n = HLA-G Lineagea ‘URR Haplotypeb Codant Haplotypec’ UTR Fréquence Haplotypée Haplotypée Etendue HG a G :: UTR- Ga / G :: / UTR- HGa a G ::: UTR- Ga / G ::: / UTR- d G ::: nouveau UTR- Ga / G ::: nouveau / UTR- HG a G ::: UTR- Ga / G ::: / UTR- a G: N UTR- Ga / G: N / UTR- a G ::: nouveau UTR- Ga / G ::: nouveau / UTR- HG e G ::: UTR- Ge / G ::: / UTR – d G ::: UTR- Gd / G ::: / UTR- HGb f G ::: UTR- Gf / G ::: / UTR- HGc b G ::: UTR- Gb / G ::: / UTR – HLA-G Lineagea ‘URR Haplotypeb Codage Haplotypec’ UTR Haplotypé Fréquence Haplotypée étendue HG a G :: UTR- Ga / G :: / UTR- HGa a G ::: UTR- Ga / G ::: / UTR- d G ::: nouveau UTR- Ga / G ::: nouveau / UTR- HG a G ::: UTR- Ga / G ::: / UTR- a G: N UTR- Ga / G: N / UTR- a G: :: nouveau UTR- Ga / G ::: nouveau / UTR- HG e G ::: UTR- Ge / G ::: / UTR- d G ::: UTR- Gd / G ::: / UTR- HGb f G ::: UTR- Gf / G ::: / UTR- HGc b G ::: UTR- Gb / G ::: / UTR- Abréviations: HLA-G, antigène leucocytaire humain-G; URR, région de réglementation ou de promoteur en amont; UTR, lignées non traduites regionaHLA-G ont été nommées selon une étude antérieure bHLA-G ‘Les haplotypes URR ont été nommés selon la nomenclature utilisée dans les études précédentes Les haplotypes codant cHLA-G ont été nommés selon la nomenclature utilisée dans les études antérieures [, ], basé sur la base de données internationale d’immunogénétique wwwebiacuk / ipd / imgt / hladHLA-G Les haplotypes UTR ont été nommés selon la nomenclature utilisée dans les études précédentes [,,] Les haplotypes étendus eHLA-G ont été nommés selon la nomenclature utilisée dans une étude antérieure. ; Cependant, des associations suggestives de seuils non corrigés, P = ont été identifiées entre certains haplotypes et différents stades de la maladie. La lignée HLA-G de la lignée HLA s’est révélée surreprésentée dans le groupe S par rapport à la SE; P =, SL; P = et groupés S groupés; % CI, -; P =, comme la table URR correspondante et la table UTR-haplotypes correspondante. En outre, la lignée HLA-G HG était surreprésentée dans la SL par rapport au groupe SE OR; P =, comme la région correspondante ‘URR, G * ::: coding et’ UTR-haplotypes Table; Tableau supplémentaire

Tableau Association entre le stade de la trypanosomose humaine africaine et la comparaison de l’haplotype antigène-G leucocyte humain OU SEa% CI P Valeur SE vs S lignage HLA-G HGb – c ‘URR ab – c’ UTR UTR-b – c SL vs S lignage HLA-G HGb – c ‘URR ab – c’ UTR UTR-b – c SL vs SE Lignée HLA-G HGd – c ‘URR ed – c’ UTR UTR-d – c Région de codage G * ::: d – c Comparaison OU SEa % CI P Valeur SE vs S lignage HLA-G HGb – c ‘URR ab – c’ UTR UTR-b – c SL vs S lignage HLA-G HGb – c ‘URR ab – c’ UTR UTR-b – c SL vs SE HLA-G lignée HGD – c ‘URR ed – c ‘UTR UTR-d – c Région de codage G * ::: d – c Abréviations: CI, intervalle de confiance; THA, trypanosomose humaine africaine; HLA-G, antigène leucocytaire humain-G; OU, odds ratio; S, scène; SE, stade précoce; SL, stade avancé; SE, erreur standard; URR, région de réglementation ou de promoteur en amont; UTR, région non traduite Une régression logistique multinomiale a été appliquée pour étudier l’association entre les variables explicatives HLA-G haplotypes, sexe, âge, foyers de THA, et temps d’exposition et stades de la maladie HAT S, SE et SL variables explicatives avec ou sans P significatif les valeurs sont présentées dans le tableau supplémentaire. b La concentration de THA était également associée au stade de la maladie Tableau supplémentaire c Significatif à P & lt; Les mêmes analyses ont été effectuées en incluant le niveau sHLA-G du CSF comme autre variable explicative. Un niveau plus élevé de sHLA-G dans le LCR et une surreprésentation de l’haplotype HG comme le «URR» correspondant. UTR et région codante ont été trouvées dans le SL par rapport au seuil non corrigé du groupe SE, P =, suggérant un effet indépendant de ces variables. Tableau supplémentaire Enfin, nous avons analysé les associations entre les marqueurs simples et les haplotypes HLA-G avec le niveau sHLA-G l’association a été trouvée avec le plasma sHLA-G ou le niveau de CSF après que les données de correction de Bonferroni ne sont pas montrées

DISCUSSION

De fortes concentrations plasmatiques de sHLA-G ont été associées à un risque nettement accru de développement ultérieur de la maladie dans le groupe SERO, ce qui plaide en faveur d’un rôle précoce du sHLA-G dans la régulation des réponses immunitaires protectrices versus délétères contre T. brucei gambiense. que sHLA-G en combinaison avec d’autres outils sérologiques T brucei gambiense, par exemple, le test de trypanolyse peut fournir des outils pronostiques utiles pour identifier les individus qui peuvent évoluer vers la maladie ou présenter un risque pour la communauté en hébergeant des trypanosomes circulants. Des études complémentaires sur des cohortes plus importantes d’autres zones endémiques sont néanmoins nécessaires pour mieux caractériser le rôle de HLA-G dans la progression de la THA et déterminer sa spécificité et sa sensibilité comme outil de pronostic, car il est connu que d’autres infections, telles que paludisme, sont associés à une augmentation des taux de sHLA-G Néanmoins, des études de coinfection Les modèles animaux ont montré que la co-infection par helminth-T brucei et Plasmodium berghei-T brucei pouvait moduler la réponse immunitaire de l’hôte et augmenter la parasitémie chez l’hôte . leur impact sur l’expression de HLA-G est inconnu mais doit être exploré Bien qu’aucune association significative n’ait été trouvée entre le niveau de sHLA-G plasmatique et les différents stades de la maladie, différents profils d’expression de sHLA-G dans le LCR ont été associés aux stades de la maladie. et les stades méningo-encéphalitiques tardifs Des taux élevés de cytokines avec des propriétés inflammatoires interleukine et anti-inflammatoire ont été rapportés dans le LCR des patients en stade avancé [,,] La THA se développe lorsque les trypanosomes traversent la barrière hémato-encéphalique, induisant un processus neuroinflammatoire associé à l’infiltration leucocytaire Up-régulation de sHLA-G observée dans le LCR sous pathologique Les conditions sont provoquées par les macrophages, les microglies, les cellules endothéliales et les monocytes Dans le CSF, la régulation ascendante HLA-G peut avoir des effets distincts et opposés dans les maladies de la THA D’une part, HLA-G pourrait faciliter la prolifération parasitaire en inhibant les cellules immunitaires mais dans le cadre de cette étude, aucune association significative n’a été trouvée entre les polymorphismes HLA-G et les différents stades et statuts de la maladie après correction pour des tests multiples. Cependant, des associations suggestives ont été observées qui méritent un examen plus approfondi pour déterminer si elles reflètent des artefacts statistiques ou de véritables découvertes biologiques. La lignée HLA HLA-G a été associée à un risque moindre de développer le stade méningo-encéphalitique de la maladie. Invasion du SNC par des parasites En outre, la lignée HG HLA-G était associée à un risque accru de Par conséquent, le HG peut être impliqué dans l’invasion avancée du SNC par les parasites responsables des troubles neurologiques de la maladie. Dans une étude précédente, UTR-, et dans une moindre mesure UTR-, ont été trouvés Les résultats actuels renforcent la pertinence de l’UTR et de l’UTR dans la progression de la maladie HAT Bien que l’étude génétique n’ait pas été concluante, probablement en raison du manque de puissance statistique, la lignée HG La surreprésentation dans le groupe S et la lignée HG surreprésentée dans le groupe SL pourraient expliquer les différents niveaux de sHLA-G dans le LCR mesurés dans différents stades HAT. Néanmoins, les haplotypes HLA-G peuvent également coder des protéines HLA-G solubles ou liées à la surface différemment de ceux détectés par notre méthode expérimentale en se concentrant sur les isoformes de sHLA-G et G Nous avons également trouvé d’autres variables à associer à la distribution de la maladie, telles que la concentration, x, et âge Ces associations sont principalement dues aux différences de profils d’exposition aux morsures entre et au sein des foyers et des recrutements individuels lors de l’enquête médicale La présente étude soutient fortement l’idée que les taux de protéines sHLA-G et éventuellement les polymorphismes génétiques HLA-G La concentration plasmatique de sHLA-G semble être un marqueur pronostique de la progression de la maladie chez des personnes séropositives parasitologiquement non confirmées, actuellement non traitées dans la plupart des régions de faible endémie, en raison de la faible valeur prédictive positive du champ. -les tests sérologiques applicables et la longue durée et la toxicité des traitements disponibles La détection du sHLA-G est donc un outil prometteur pour aider les décisions de traitement de ces individus et pourrait aider à améliorer le contrôle du réservoir humain des trypanosomes, sur la voie de l’élimination de la THA. L’implication du HLA-G dans les maladies parasitaires tropicales, comme suggéré par plusieurs études récentes, doit être exploré

Remarques

Remerciements Nous remercions les sujets de l’étude et les agents de la communauté villageoise qui ont participé activement aux enquêtes médicales et de suivi. Nous sommes également très reconnaissants aux techniciens, infirmières, chauffeurs et étudiants du PCN guinéen et du CIRDES Centre International de Recherche-Développement sur l ‘Elevage en Zones Subhumides pour son implication dans la lutte contre la trypanosomiase humaine africaine. Soutien financier Cette étude a été soutenue par l’Institut de Recherche pour le Développement, notamment une bourse de doctorat à LT, le Ministère des Affaires Etrangères par le biais du projet FSP / REFS Organisation Mondiale de la Santé, la subvention du programme “Pesquisador Visitante Especial” de Ciêna sem Fronteiras -, la Région Ile-de-France octroie à LG, et CNPq Ciêna sem Fronteiras BJT subventions / – et – aux conflits d’intérêts FC DPotential Tous les auteurs: Non Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêt potentiels. Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués