Influence de l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine sur l’infection aiguë par le virus de l’hépatite A

Pour évaluer l’influence possible de l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine de type VIH sur l’évolution clinique de l’infection aiguë par le virus de l’hépatite A, les hommes homosexuels infectés par le VIH et les sujets non infectés par le VIH ont été comparés http://sildenafilca.org. Infectés que chez les patients non infectés par le VIH P & lt; La durée de la virémie chez les patients infectés par le VIH médiane, jours était significativement P & lt; plus longtemps que chez les patients non infectés par le VIH médiane, jours où les patients infectés par le VIH présentaient une élévation plus faible des taux d’alanine aminotransférase que les patients non infectés par le VIH P & lt; mais avait des élévations plus élevées dans les niveaux de phosphatase alcaline que les patients non infectés par le VIH P & lt; Certains patients infectés par le VIH avaient encore une virémie à VAV lorsque les symptômes cliniques avaient disparu et que les taux d’alanine aminotransférase étaient redevenus normaux – jours après l’apparition des symptômes. L’infection par le VIH était associée à une prolongation de la virémie. Infection à VHA chez des hommes homosexuels infectés par le VIH

L’infection par le virus de l’hépatite A était prévalente dans le monde avant la Seconde Guerre mondiale, mais sa séroprévalence a diminué depuis lors dans les pays développés La maladie elle-même a été bien étudiée et décrite en détail dans les manuels de maladies infectieuses. Dans l’infection par le VHA, une grande quantité de virus est excrétée dans les matières fécales, surtout pendant la période d’incubation tardive et au début des symptômes, et l’excrétion se poursuit jusqu’à l’élévation maximale des taux d’ALAT ou d’aspartate aminotransférase. la durée de la virémie est considérée comme assez courte, plus courte que la période d’excrétion fécale , et limitée à la dernière moitié de la période d’incubation , bien que l’utilisation des techniques moléculaires actuelles ait montré que la plus longtemps qu’on ne le pensait Cependant, l’information est encore très limitée; parce que l’infection par le VHA est essentiellement une infection aiguë, les échantillons de sérum séquentiels pour un suivi à long terme n’ont pas été stockés dans la plupart des milieux cliniques La voie de l’infection au VHA est presque exclusivement la transmission fécale-orale. transmis de personne à personne comme une maladie sexuellement transmissible chez les hommes homosexuels et comme une infection nosocomiale dans les unités de soins intensifs néonatals Elle peut aussi être transmise aux hémophiles par transfusion de produits sanguins Parce qu’il n’y a pas de réservoir non humain infection persistante chez l’homme, le VHA doit être transmis en série d’une personne atteinte d’un cas aigu aux personnes sensibles. Par conséquent, les épidémies sont sporadiques dans les pays développés à l’heure actuelle, cependant, les foyers d’infection au VHA chez les hommes homosexuels infectés par le VIH peuvent durer. Ces données épidémiques pourraient indiquer que l’excrétion fécale est prolongée en cas d’infection concomitante par le VIH Dans la présente étude, nous avons déterminé la durée de l’infection par le VHA sur la base du taux de VHA dans le sérum plutôt que dans les matières fécales. Nous avons ensuite comparé plusieurs caractéristiques de l ‘infection par le VHA chez des patients infectés par le VIH et non infectés par le VIH afin de déterminer l’ influence de l ‘infection par le VIH sur l’ évolution clinique de l ‘infection aiguë par le VHA.

Patients et méthodes

Patients D’août à septembre, des hommes homosexuels infectés par le VIH ont été diagnostiqués avec une infection aiguë au VHA et hospitalisés avec des manifestations cliniques et des anomalies biologiques dans le AIDS Clinical Center, Centre médical international du Japon Le diagnostic a été confirmé par détection d’IgM anti-HAV Les patients atteints d’hépatite B et C ont été exclus En conséquence, les patients ont été exclus de l’étude: ont été co-infectés par le virus de l’hépatite C, ont été co-infectés par l’hépatite B À titre comparatif, des patients non infectés par le VHA, infectés par le VHA et dont les échantillons de sérum séquentiels ont été prélevés et stockés à travers ont été choisis arbitrairement parmi ceux du Centre collaborateur de l’Organisation mondiale de la Santé sur les virus. Hépatite, Centre médical national de Nagasaki, Nagasaki, Japon Dans le non-H Les caractéristiques démographiques du groupe d’étude sont présentées dans le tableau Tous les échantillons de sérum ont été conservés à – ° C jusqu’à leur utilisation Les données cliniques et de laboratoire ont été revues rétrospectivement après l’achèvement de tous les tests de laboratoire, y compris le titrage et la durée de HAV virémie

Infection à virus HAVTable View largeTélécharger les caractéristiques démographiques des patients infectés par le VIH et non infectés par le VIH et infectés par le virus de l’hépatite AHAVA Un consentement éclairé a été obtenu de tous les patients infectés par le VIH. au moment où des échantillons ont été obtenus -Les analyses sérologiques et la détection et le titrage des anticorps anti-HAV IgG et IgM anti-HAV dans des échantillons de sérum ont été déterminés par utilisation de kits HAVAB et HAVAB-M Dinabot, respectivement ARN total de sérum du test SUMAI Sumitomo, selon les instructions fournies par l’ARN du fabricant, a été remis en suspension dans μL d’eau distillée, et μL de la suspension a été soumis à amplification Le gène VP / A du HAV a été amplifié par PCR en utilisant un ARN en une étape Kit PCR TaKaRa Shuzo et EX Taq polymérase TaKaRa Shuzo, selon les instructions du fabricant Séquences d’ensembles d’amorces pour la transcription inverse RT PCR, le la première PCR, et la deuxième PCR utilisée dans cette étude avec quelques modifications pour les séquences japonaises étaient les suivantes: pour la première PCR, les positions «-GGTTTCTATTCAGATTGCAAATTA» et «-AGTAAGAACTCCAGCATCCATCTC»; Pour la deuxième PCR, les positions -TTTAGTTGTTATTTGTCTGTC et les positions -CATTATTTCATGCTCCTCAG -Amplification impliquait des cycles de dénaturation à ° C pendant min, d’annelage à ° C pendant min, et d’extension à ° C pour min. Reamplification d’aliquotes -μL de la première PCR On a ensuite soumis 10 microlitres du produit de PCR résultant à une électrophorèse sur gel d’agarose dans un gel contenant du bromure d’éthidium g / ml et on a visualisé le résultat avec une illumination ultraviolette pour éviter la contamination pendant la procédure. Pour mesurer la charge de VHA dans le sérum, l’échantillon de sérum a été dilué séquentiellement, après quoi une PCR nichée a été réalisée sur chaque échantillon dilué. La charge de VHA a été semi-quantitative et exprimée comme positive dans une aliquote diluée. n Pour cette analyse, nous avons inclus uniquement les patients pour lesquels les échantillons ont été conservés quelques jours après l’apparition des symptômes cliniques. s analyse des patients infectés par le VIH et des patients non infectés par le VIH La période moyenne [± ET] entre l’apparition des symptômes et l’analyse du VHA dans le sérum n’était pas significativement différente entre les groupes VIH-, ± journées; non-VIH, ± jours Définition de la durée de la virémie VHA La durée de la virémie VHA était définie comme la durée entre l’apparition des symptômes cliniques et le moment où le dernier échantillon de sérum était positif pour le VHA, à condition qu’après ce dernier échantillon positif, Un autre échantillon de sérum avec des résultats négatifs a été obtenu les jours suivants. Chez certains patients, la conversion des résultats sériques en négatifs n’a pas été détectée en raison du manque d’échantillons stockés. Ces cas ont été exclus de l’analyse de la durée de la virémie. estimation la plus courte De l’ensemble du groupe de patients de l’étude, les patients infectés par le VIH et non infectés par le VIH répondaient aux critères de calcul de la durée de virémie.Analyse séquentielle du VHA Pour exclure les différences d’efficacité de la PCR dues à l’inadéquation des séquences isolats pour la mesure de la charge du VHA, les amorces de la PCR nichée et leurs régions flanquantes ont été séquencées Pour l’analyse de la séquence, RN totale Un extrait par la même méthode a été remis en suspension dans μL d’eau distillée, et μL de la suspension a été soumis à une PCR imbriquée RT à la fois dans la première et la deuxième PCR, l’amplification a été répétée pour les cycles de dénaturation ° C pour min, et extension à ° C pour min Les ensembles d’amorces pour cette analyse étaient les suivants: pour la première PCR, les positions “-CTGCTCTTGGAGCTGTTAGA” et “-GAGTTGGCAGCAATTTCTTCA”; Pour la seconde PCR, les positions ‘-TCAGATTAGATTGCCATGGT – et’ -AGATCCAACATTCCATGTGG – Après électrophorèse sur gel d’agarose%, les produits de PCR résultants ont été purifiés avec SUPREC- Takara Shuzo, selon les instructions du fabricant. Le séquençage a été effectué avec un séquenceur automatique. Biosystèmes avec l’utilisation du kit Séquence de cycle Terminator Big Dye Applied Biosystems Des séquences d’acides aminés ont été déduites par Genetyx-Win, version Software Development Un arbre phylogénétique a été construit à partir de la matrice de distance par la méthode de jointure voisine. Ces procédures ont été calculées à l’aide de CLUSTAL W , version Les numéros d’accession des séquences nucléotidiques rapportées dans cette étude ont été attribués à la banque de données ADN du Japon sous les numéros AB-ABAnalyses statistiques Les données de laboratoire pour les patients infectés par le VIH et non infectés par le VIH ont été comparées. données, telles que la titration de la virémie HAV et la durée de la virémie, ont été analysés par l’utilisation du test U de Mann-Whitney Les variables catégorisées ont été comparées avec l’utilisation du test with avec la correction de Yates P & lt; était considéré comme significatif

Résultats

Comparaison des caractéristiques cliniques des patients infectés par le VIH et non infectés par le VIH Chez les patients infectés par le VIH, il n’y avait pas de corrélation entre l ‘élévation des taux d’ AST et / ou d ‘ALT, le nombre de cellules CD et la charge VIH. Les symptômes cliniques tels que fièvre, nausées et malaise général chez les patients infectés par le VIH étaient similaires à ceux rapportés chez les patients non infectés par le VIH. Comme résumé dans le tableau, les concentrations sériques d’ALT étaient élevées dans les deux groupes, mais significativement plus faibles. – infecté que chez les patients non infectés par le VIH P & lt; D’autres mesures, telles que AST et bilirubine totale, n’étaient pas significativement différentes entre les groupes, bien qu’elles aient eu tendance à être plus élevées chez les patients non infectés par le VIH que chez les patients infectés par le VIH. En revanche, les concentrations sériques de phosphatase alcaline et de la glutamyltransférase était significativement plus élevée dans le groupe infecté par le VIH que dans le groupe non infecté par le VIH P & lt; pour la phosphatase alcaline et P & lt; pour la γ-glutamyltransférase

Tableau View largeTélécharger les résultats de tests de laboratoire anormaux au début de l’infection par le virus de l’hépatite AHAV chez les patients infectés par le VIH et non infectés par le VIHTable View largeTélécharger les résultats de tests de laboratoire anormaux au début de l’infection par le virus de l’hépatite A Patients infectés par le VIH: La charge du VHA au début de l’infection aiguë par le VHA La charge du VHA chez les patients infectés par le VIH était significativement plus élevée P & lt; que chez les patients non infectés par le VIH dilution médiane pour un résultat positif, × – vs × -; L ‘analyse des séquences du gène VP / A du VHA a révélé que les souches chez les patients infectés par le VIH étaient identiques et que les autres étaient également très étroitement liées, selon l’ analyse des arbres phylogénétiques. En revanche, le VHA obtenu à partir de différents sites et à des moments différents de patients non infectés par le VIH provenait de sources différentes dans chaque cas, bien que toutes les souches aient également appartenu au sous-type A Nous avons postulé que l ‘éclosion chez les patients infectés par le VIH était causée par une seule souche de VHA, alors que les infections au VHA chez les patients non infectés par le VIH étaient causées par diverses souches, qui affectaient l’ efficacité de la PCR en raison de l ‘incompatibilité modèle – matrice. charges HAV mesurées entre les groupes Pour exclure cette possibilité, nous avons analysé des séquences de sites d’amorces et leurs régions flanquantes de chaque virus de n patients infectés par le VIH L’analyse a révélé certains polymorphismes dans le VHA Cependant, il n’y avait pas de polymorphismes qui affectent l’efficacité de la PCR, tels que les mésappariements amorce-matrice de & gt; bases ou certaines discordances d’amorce-modèle à la base ‘-terminal données non montrées

Table View largeTélécharger slideTitration, durée et demi-vie du virus de l’hépatite A virémie HAV chez les patients infectés par le VIH et non infectés par le VIHTable Voir grandDownload, durée et demi-vie du virus de l’hépatite A virémie HAV chez les personnes infectées par le VIH et les patients non infectés par le VIH

Figure Vue largeDisque de téléchargementAnalyse des arbres généalogiques du virus de l’hépatite A Séquence de VP / A du VHA obtenue chez des patients infectés par le VIH et non infectés par le VIH Les désignations «VIH» à «VIH» indiquent les séquences géniques VP / A du VHA des patients infectés par le VIH ; les désignations «non VIH» à «non VIH» indiquent les séquences de gènes équivalentes de patients non infectés par le VIH Treize séquences de gènes provenant de patients infectés par le VIH étaient identiques au VIH, et les séquences restantes étaient également étroitement liées VIH et VIH. des séquences de gènes de patients non infectés par le VIH ont révélé une variété de souches nonVIH et nonVIH constituées de souches et de nonVIH de souches AGM a été utilisé comme exogroupe pour enraciner l’arbreFigure View largeTélécharger diapositiveAnalyse arborescylogénétique du virus de l’hépatite A Séquence génique VP / A du VHA obtenus à partir de patients avec et sans infection par le VIH de type VIH Les désignations «VIH» à «VIH» indiquent des séquences géniques VP / A de VHA provenant de patients infectés par le VIH; les désignations «non VIH» à «non VIH» indiquent les séquences de gènes équivalentes de patients non infectés par le VIH Treize séquences de gènes provenant de patients infectés par le VIH étaient identiques au VIH, et les séquences restantes étaient également étroitement liées VIH et VIH. des séquences de gènes provenant de patients non infectés par le VIH ont révélé une variété de souches non-VIH et non-VIH constituées de souches et de non-VIH de souches AGM a été utilisé comme exogroupe pour enraciner l’arbre.Durée de la virémie HAV après l’apparition des symptômes La durée de virémie VHA après le début de les symptômes étaient significativement plus longs chez les patients infectés par le VIH que chez les patients non infectés par le VIH médiane, jours vs jours; P & lt; ; Cependant, il n’y avait pas de corrélation entre la durée de la virémie et les numérations cellulaires CD ou CD chez les patients infectés par le VIH. La durée de la virémie n’a pas non plus de corrélation avec la charge VIH ou le type de traitement anti-VIH. Virémie HAV Le profil de désintégration de la virémie HAV a révélé une diminution exponentielle, comme celle caractéristique du VIH- ; une ligne droite pour la désintégration était approximativement indiquée par au moins des points de données. Pour une telle décroissance exponentielle, la demi-vie du virus est calculée comme t = ln / pente de la ligne de désintégration. La demi-vie médiane de la virémie HAV était de jours pour les patients infectés par le VIH et de jours pour les patients non infectés par le VIH. Il n’y avait pas de différence significative. = dans le taux de décroissance entre les groupes, bien que la demi-vie chez les patients infectés par le VIH ait tendance à être plus longue

Diagramme de jour du virus de l’hépatite A Virémie chez les patients avec A et sans infection par le VIH Les taux de VHA ont été semi-déterminés par PCR nichée dans des échantillons sériques dilués × -n jour où les manifestations cliniques de l’infection aiguë au VHA ont été documentées La régression linéaire a été utilisée pour obtenir la droite la plus appropriée pour au moins des points de données. La longueur de chaque ligne a été déterminée par le point positif initial et le dernier point positif par jour. A et sans B infection par le VIH Les taux de VHA ont été semi-déterminés par PCR nichée dans des échantillons sériques dilués × -n jour où les manifestations cliniques de l’infection aiguë au VHA ont été documentées. La régression linéaire a été utilisée pour obtenir la droite la plus appropriée. La longueur de chaque ligne a été déterminée par le point positif initial et le dernier point positif par jour. Les symptômes cliniques ont disparu en quelques jours chez les patients des deux groupes La gravité de l’infection aiguë au VHA, jugée par les concentrations sériques d’ALT, était moindre chez les patients infectés par le VIH que chez les patients non infectés par le VIH. les changements en série dans les concentrations sériques d’ALT chez les patients qui étaient négatifs ou positifs pour le VHA après l’apparition des symptômes En général, le profil des changements en série dans ALT était similaire pour les groupes Dans les premiers jours après l’apparition des symptômes, les concentrations d’ALT étaient élevé chez tous les patients, et tous les patients non infectés par le VIH, sauf étaient positifs au VHA Du jour au jour après le début, les concentrations d’ALT sont revenues à la normale chez les patients des deux groupes pour lesquels de telles données étaient disponibles. positifs pour le VHA De jour, les échantillons de sérum étaient négatifs pour le VHA chez tous les patients non infectés par le VIH. En revanche, le VHA était toujours détecté dans le sérum d’au moins patients atteints de THA lorsque les taux d’ALT sont revenus à la normale De jour, tous les échantillons de sérum étaient négatifs pour le VHA, alors que les concentrations d’ALT étaient toujours supérieures à la limite supérieure normale pour certains patients.

Figure Vue largeDownload slideCorrelation entre sérum alanine aminotransférase Concentration d’ALT et virus de l’hépatite A Charge de VHA dans des échantillons sériques de patients infectés par le VIH A et patients non infectés par le VIH B La concentration d’ALT la plus faible enregistrée pour chaque patient est • des échantillons de sérum positifs pour le VHA; ○, patients avec des échantillons de sérum qui ont été testés négatifs pour le VHA; ligne horizontale épaisse, limite supérieure normale de la concentration d’ALT & lt; IU / LFigure View largeTéléchargementCorrélation entre la concentration sérique d’alanine aminotransférase ALT et le virus de l’hépatite A Charge de VHA dans des échantillons sériques de patients infectés par le VIH et non infectés par le VIH B La concentration d’ALT la plus faible enregistrée pour chaque patient est •; patients avec des échantillons de sérum positifs pour le VHA; ○, patients avec des échantillons de sérum qui ont été testés négatifs pour le VHA; ligne horizontale épaisse, limite supérieure normale de la concentration d’ALT & lt; IU / L

Discussion

Les nouveaux résultats de cette étude sont que, au début des symptômes, la charge de VHA est plus élevée et la durée de virémie VHA est plus longue chez les patients infectés par le VIH que chez les patients sans VIH, mais l’élévation du taux d’ALAT est moindre. On pourrait postuler que le système immunitaire affaibli des patients infectés par le VIH pourrait ne pas être en mesure de répondre adéquatement à l ‘infection par le VHA, entraînant une charge élevée de VHA et une virémie prolongée. Il existe d’ autres explications possibles. causée par une seule souche chez des patients infectés par le VIH, mais de multiples souches dans des cas sporadiques non infectés par le VIH La première explication est que la différence est artificielle, causée par des différences dans l’efficacité de la PCR; la seconde explication est que l’infection chez les patients infectés par le VIH était causée par une souche unique capable d’échapper à l’immunité de l’hôte. La première explication a été écartée par l’analyse de séquence des sites d’amorce du VHA obtenus chez des patients non infectés par le VIH. une deuxième explication est également improbable car, chez nos patients infectés par le VIH, la durée de la virémie varie de à quelques jours. L’hypothèse de la souche unique pourrait être exclue en analysant les patients non infectés par le VIH infectés par cette souche unique du VHA ou en inoculant des chimpanzés. expérimentalement avec cette souche et d’autres souches pour comparer la durée de la virémie et suivre les niveaux d’enzymes hépatiques Dans cette étude, plus de la moitié des patients non infectés par le VIH étaient des femmes, alors que tous les patients infectés par le VIH étaient des hommes. Cependant, en ce qui concerne la gravité et l’évolution clinique de l’infection aiguë par le VHA, les différences selon le sexe n’ont pas encore été démontrées dans cette maladie bien connue. Il est peu probable que la différence graphique ait affecté nos résultats. Les études histopathologiques révèlent une activation focale marquée des cellules tapissant les sinus et une accumulation de lymphocytes et d’histiocytes dans le parenchyme; ces dernières cellules remplacent souvent les hépatocytes qui ont été perdus par nécrose cytolytique Les lymphocytes T cytotoxiques ont été impliqués dans une lésion hépatique causée par une infection aiguë par le VHA Ces résultats indiquent fortement que les lésions immunitaires sont le principal mécanisme pathogène du VHA aigu. Notre constatation que les taux d’ALT étaient moins élevés chez les patients infectés par le VIH que chez les patients non infectés par le VIH étaye cette hypothèse. Par conséquent, la durée et la gravité des signes cliniques et les résultats anormaux des tests de laboratoire peuvent différer. , en fonction de leur nombre de cellules CD Cependant, nous n’avons pas trouvé de telles différences dans cette étude, probablement en raison du petit nombre de patients étudiés. En revanche, les taux de phosphatase alcaline et de γ-glutamyltransférase étaient significativement plus élevés chez les patients infectés par le VIH. Patients infectés par le VIH D’un autre côté, le VHA pourrait causer une lésion directe des voies biliaires, bien que cette hypothèse À tester dans de futures étudesSeules quelques études entreprises depuis le développement récent des techniques de PCR ont analysé les niveaux de virémie HAV Bower et al , qui ont utilisé la méthode RT-nested PCR, ont rapporté que la virémie dans le VIH … Les patients infectés ont duré plusieurs jours après la mesure du taux maximal d’enzymes hépatiques, qui est la plus longue période de virémie rapportée. Sur la base de nos résultats, le rétablissement des taux d’enzymes hépatiques n’indique pas toujours que la virémie a été résolue par Yotsuyanagi et al. chez certains patients, l’excrétion fécale du VHA a duré plus longtemps que la virémie et l’excrétion fécale persiste pendant des mois, même en l’absence d’infection VIH. Une virémie prolongée peut entraîner une excrétion fécale prolongée, bien qu’il n’y ait aucune preuve de virémie ou d’excrétion fécale. la transmission de l’infection dans les régions où la prévalence du VHA est élevée, la plupart des enfants sont infectés tôt dans la vie, et ces infections sont généralement asymptomatiques. Plus tard dans la vie, elle est souvent associée à des signes cliniques sévères. Nos données suggèrent qu’une virémie HAV prolongée prolongée, chez des patients infectés par le VIH, suggérant une excrétion fécale prolongée du VHA, a probablement causé la longue durée de l ‘épidémie étudiée. ont signalé que les pratiques sexuelles à risque élevé chez les hommes homosexuels sont un facteur de risque de transmission du VHA chez les hommes infectés par le VIH L’utilisation du préservatif lors des rapports homosexuels ne peut pas protéger contre la transmission du VHA. diminution, en fonction du nombre de lymphocytes T CD, chez les patients infectés par le VIH , la vaccination est fortement recommandée pour les hommes homosexuels dont le test est négatif pour les anticorps anti-VHA , en particulier ceux infectés par le VIH

Remerciements

Nous remercions Yukiko Takahashi, pour la préparation des échantillons, et F G Issa de Word Medex http: // wwwword-medexcomau, pour la lecture attentive et l’édition du manuscrit