Mycoplasma genitalium Infections chez des hommes asymptomatiques et des hommes atteints d’urétrite participant à une clinique de maladies sexuellement transmissibles à la Nouvelle-Orléans

Nous rapportons les résultats d’une étude de Mycoplasma genitalium détectée par un test de polymérase en chaîne [PCR] chez des hommes atteints d’urétrite et chez des sujets témoins asymptomatiques dans une clinique de maladies sexuellement transmissibles à La Nouvelle-Orléans pour les hommes avec urétrite et hommes asymptomatiques. Les taux d’infection génitale M genitalium chez les hommes symptomatiques et asymptomatiques qui étaient négatifs pour Chlamydia trachomatis et Neisseria gonorrhoeae étaient respectivement de% et%, p = M taux de co-infection génitale chez les hommes atteints d’urétrite chlamydienne et gonococcique étaient respectivement% et% Chez les hommes atteints d’urétrite, les sensibilités de PCR des échantillons d’urine et d’écouvillon pour la détection de M genitalium étaient de% et de%, respectivement, M genitalium est associé à des non-gonococciques. urétrite dans cette population

Urétropathie non gonococcique La NGU est l’une des maladies sexuellement transmissibles les plus courantes. MST diagnostiquées chez les hommes Les hommes atteints de NGU peuvent être catégorisés dans ceux avec et sans infection par Chlamydia trachomatis Des études effectuées à la fin et au début ont montré que% -% Les NGU étaient dues à une infection à C. trachomatis Plus récemment, la proportion de cas de NGU causée par C trachomatis a été observée aussi faible que%, probablement en raison de la mise en œuvre et de l’amélioration des programmes de dépistage et de traitement pour C trachomatis pendant la s Ureaplasma urealyticum semble causer certains de ces cas de NGU non chlamydiale En fait, à un moment donné, on pensait que cet organisme causait la majorité des cas de NGU, mais des études récentes n’ont pas montré de différences de prévalence entre U urealyticum et les contrôles Trichomonas vaginalis provoque une petite proportion de cas de NGU, tout comme le virus de l’herpès simplex Les rôles de divers autres organismes dans NGU ont été étudiée sans résultats concluants M genitalium a été isolé pour la première fois dans l’urètre des hommes atteints d’urétrite , mais les études visant à évaluer son association avec la maladie ont été inhibées par la difficulté de croissance de l’organisme en culture. la détection est devenue possible après le développement de tests PCR spécifiques Les études ultérieures qui ont utilisé ces tests ont fourni des preuves solides d’une association entre l’urétrite aiguë chez les hommes hétérosexuels et l’infection M genitalium [, -] Ces nouvelles découvertes suggèrent que l’association être causale, une notion compatible avec les caractéristiques de virulence connues de ce microorganisme et sa capacité à provoquer une urétrite chez les primates non humains Nous avons entrepris cette étude pour tester l’hypothèse que M genitalium est associé à l’urétrite chez les hommes New Orleans, en Louisiane, et, en même temps, de déterminer les caractéristiques cliniques et épidémiologiques s de la maladie associée au M genitalium

Patients et méthodes

est un tampon et un μL de tampon de liaison Kit de préparation de PCR haute pureté; Boehringer Mannheim Après addition de μL de protéinase K, le mélange a été incubé h à ° C puis traité selon les instructions du fabricant. Les échantillons ont été mis en suspension dans μL de tampon d’élutionSwabs ont été doucement mélangés pour min dans μL de tampon de liaison et μL de lyse total des tampons, μL à l’arrivée au laboratoire Les écouvillons ont ensuite été essorés sur les côtés du tube et la suspension tampon de liaison / tampon de lyse a été répartie également en flacons et conservés à – ° C. La cible de PCR était un fragment de -bp commençant en amont du codon de départ du gène d’adhérence de M genitalium. Les désignations des amorces étaient MgPaW ‘-AAGTGGAGCGATCATTACTAAC- ‘Et MgPaWR’ -CCGTTGTTATCATACCTTCTGA- ‘Ces amorces ont été conçues dans notre laboratoire sur la base d’une analyse informatique de Le mélange réactionnel de -μL PCR contenait μL de lysat, pM de chaque amorce, mM de chaque dNTP New England Biolab, mM de MgCl, et U des conditions d’amplification par PCR de la polymérase Gold Taq étaient de ° C pendant min, suivi de cycles à ° C pour s, ° C pour s, ° C pour s, et une période d’extension finale de min à ° CTen microlitres du produit de PCR a été soumis à électrophorèse à travers% gel d’agarose, coloré au bromure d’éthidium, et photographié avec Polaroid camera La présence de bandes de taille appropriée a été déterminée à partir de la photographie. Les produits de PCR ont ensuite été transférés du gel aux membranes Nytran Plus Schleicher & amp; Schuell pendant la nuit au moyen d’un test de transfert de Southern La membrane a ensuite été cuite à ° C pendant h suivie d’une préhybridation pour h à ° C dans un tampon contenant du citrate salin standard SSC,% SDS, EDTA mM et% tampon de blocage Boehringer Mannheim Après préhybridation , pM de la sonde d’ADN interne biotinylée de M genitalium ‘-TTTGCTTACCAACCCAAGCAGTTAAG-‘; La biotine a été ajoutée et la membrane a été incubée pendant une nuit à ° C. Après des temps de lavage en × SSC /% SDS à ° ​​C, les blots ont été incubés en × SSC /% SDS avec μg de streptavidine-peroxydase Vector Laboratories La membrane a été retirée de la solution de lavage et placée face visible sur du polyéthylène. La solution de lavage retenue a été soigneusement retirée avec un tissu absorbant. La membrane a ensuite été couverte pendant min avec un réactif de détection chimiluminescent ECL Western blot test de détection réactifs; Amersham Pharmacia Biotech à température ambiante Les réactifs ont été de nouveau retirés soigneusement avec des tissus absorbants. La membrane a ensuite été complètement enveloppée dans une feuille de polyéthylène et placée dans une cassette de film radiographique avec Hyperfilm MP Amersham Pharmacia Biotech dans une chambre noire. – s, développés et séchés à l’air à température ambiante Les échantillons positifs ont été identifiés par la présence d’une bande ~ -bp, comparé à un contrôle de poids moléculaire. Pour tous les échantillons d’urine positifs, une aliquote fraîche du spécimen a été prélevée du congélateur. et amplifié une seconde fois pour contrôler toute contamination possible par PCR Pour tous les échantillons positifs sur écouvillon, la deuxième aliquote du spécimen initialement traité a été décongelée et réamplifiée. Chez les hommes symptomatiques, un échantillon initialement positif était négatif lorsque le test a été répété. ont été positifs deux fois lorsque l’autre spécimen a été utilisé et donc clairement représenté résu Des tests répétés sur des échantillons d’urine d’hommes asymptomatiques ont donné des résultats positifs mais des résultats négatifs ont été obtenus. Il est impossible de savoir si ces résultats non répétitifs étaient faussement négatifs ou si les résultats initiaux étaient faussement positifs. Des échantillons positifs provenant d’hommes symptomatiques et asymptomatiques ont eu des résultats positifs seulement sur le test de Southern, suggérant la présence d’un petit nombre d’organismes comme explication probable. Néanmoins, pour être aussi conservateur que possible dans l’estimation de l’association de M genitalium avec la maladie, On n’a pas considéré que l’organisme contenait l’organisme à moins que la première et la deuxième parties aliquotes de chaque échantillon d’urine positif et trachomatis testées aient été traitées après leur obtention et qu’elles aient été amplifiées conformément aux instructions du fabricant pour le test d’amplification d’ADN par déplacement de brin ProbeTec. Un amplif interne Les données de Gen-Probe Pace n’ont pas été utilisées dans cette analyse. Les données cliniques et comportementales ont été collectées sur des questionnaires standardisés et saisies dans Microsoft Access. L’analyse statistique a été effectuée avec tests et les tests exacts de Fisher pour les analyses bivariées. par l’utilisation du progiciel SPSS SPSS

Résultats

Les caractéristiques démographiques et comportementales des patients qui constituaient le groupe d’étude sont résumées dans le tableau Il n’y avait pas de différences démographiques significatives entre le groupe des hommes avec urétrite et le groupe témoin asymptomatique Les patients afro-américains représentaient plus de% de la population totale pour les deux groupes L’âge médian était des années, et l’âge moyen était des années Comme prévu, les hommes asymptomatiques étaient plus susceptibles d’avoir eu un partenaire sexuel récent avec une MST; C’est une raison fréquente que ces hommes visitent les cliniques de MST claudication. Les hommes symptomatiques étaient plus susceptibles d’avoir eu un nouveau partenaire récent; c’était aussi une constatation attendue parce que ces femmes sont les sources les plus courantes d’une MST nouvellement acquise chez les hommes

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques démographiques, cliniques et comportementales des hommes et des hommes sans urétrite symptomatique qui ont été évalués pour la présence de Mycoplasma genitaliumTable View largeTélécharger les caractéristiques démographiques, cliniques et comportementales des hommes et des hommes sans urétrite symptomatique qui ont été évalués pour la présence de Mycoplasma genitalium Un total de% des hommes atteints d’urétrite étaient infectés par M genitalium Les prélèvements d’écouvillon et d’urine étaient positifs pour les hommes, alors que seul l’échantillon était positif pour les hommes et que les hommes avaient des résultats positifs seulement. % des hommes infectés par C trachomatis étaient également infectés par M genitalium Parmi les hommes infectés par N gonorrhoeae,% avaient aussi une infection à M genitalium Trois% des hommes atteints à la fois d’infections à Chlamydia et à gonocoques avaient également M genitalium

Tableau View largeTélécharger slideMycoplasma genitalium taux d’infection chez les hommes atteints d’urétrite par rapport aux infections à Chlamydia trachomatis et Neisseria gonorrhoeaeTable View largeTélécharger diapositiveMycoplasma genitalium taux d’infection chez les hommes atteints d’urétrite par rapport aux infections à Chlamydia trachomatis et Neisseria gonorrhoeaeSur les échantillons d’urine et d’écouvillon qui ont eu un test de transfert de Southern Comme le résume le tableau, nous avons trouvé que les échantillons obtenus chez des hommes co-infectés à la fois par M genitalium et par Chlamydia ou gonocoques représentaient tous les résultats discordants entre l’électrophorèse sur gel d’agarose et Test de Southern blot

Tableau View largeTélécharger la lameSensibilité de l’électrophorèse sur gel d’agarose pour la détection de l’infection à Mycoplasma genitalium chez les hommes atteints d’urétrite causée par M genitalium seul et chez les hommes co-infectés par Chlamydia trachomatis et / ou Neisseria gonorrhoeaeTable View largeTéléchargement diaposensibilité de l’électrophorèse sur gel d’agarose pour la détection de Mycoplasma genitalium chez les hommes atteints d’urétrite causée par M genitalium seul et chez les hommes co-infectés par Chlamydia trachomatis et / ou Neisseria gonorrhoeae en éliminant les hommes qui ont été infectés par & gt; Nous avons pu comparer les caractéristiques cliniques et comportementales des hommes atteints d’urétrite causée par chacun des organismes seuls. Les hommes atteints d’urétrite gonococcique étaient plus âgés que les hommes infectés par C trachomatis ou M genitalium, mais la différence n’était pas significative. Les urétrites à chlamydia et celles ayant une urétrite mycoplasmique étaient moins susceptibles que les hommes atteints d’urétrite gonococcique d’avoir des antécédents de dysurie, d’avoir un écoulement brut à l’examen et d’avoir un écoulement jaune. les jours précédant l’étude qui avaient des antécédents de diagnostic ou de traitement d’une MST que les hommes atteints d’une maladie gonococcique ou chlamydiale

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des hommes atteints d’urétrite, selon l’organisme détectéTable Voir grandDownload slideCaractéristiques des hommes atteints d’urétrite, selon l’organisme détectéNous avons comparé les sujets témoins asymptomatiques aux hommes avec urétrite en basant la définition de l’infection M genitalium sur les résultats des échantillons d’urine uniquement Le nombre total d’hommes infectés par le genitalium symptomatique a été réduit, comme le montre le tableau, les taux d’infection par M genitalium, C trachomatis et N gonorrhoeae dans le groupe des hommes atteints d’urétrite étaient significativement plus élevés que dans le groupe témoin asymptomatique. hommes symptomatiques avec urétrite,% avaient un pathogène potentiel identifié. Lorsque les patients avec d’autres infections étaient exclus, M genitalium était identifié chez% des hommes présentant une urétrite symptomatique et seulement% des témoins asymptomatiques P =, déterminé par le test exact de Fisher

Tableau View largeDownload slideOrganismes identifiés chez les hommes atteints d’urétrite et chez les sujets témoins asymptomatiquesTable View largeDownload slideOrganismes identifiés chez les hommes atteints d’urétrite et chez les sujets témoins asymptomatiques

Discussion

La différence la plus frappante dans notre série par rapport à la plupart des études précédemment publiées était le taux élevé d’infection à M genitalococcus chez les hommes symptomatiques avec Chlamydia. Infection Seule une étude provenant d’Italie a rapporté des taux de co-infection aussi élevés pour ces organismes Le seul autre article publié aux Etats-Unis a rapporté que seulement% des hommes atteints d’urétrite à Chlamydia avaient une infection concomitante à M genitalium . explications pour la différence entre notre observation et les observations rapportées par la plupart des autres investigateurs Sauf pour une étude récente de Seattle , aucune des études précédentes de M genitalium chez les hommes atteints d’urétrite n’a utilisé le test de Southern. Nos données indiquent que, en présence de un organisme co-infectant, l’électrophorèse sur gel seul peut manquer de sensibilité pour la détection du tableau d’amplicon de PCR du génital M; Par conséquent, la prévalence de la co-infection a peut-être été sous-estimée dans de nombreuses études précédentes. Une autre explication possible est qu’il existe des différences dans les populations étudiées. Les données d’études réalisées en Europe occidentale, en Angleterre, au Japon et à Seattle, Les études publiées récemment par des chercheurs travaillant en Afrique présentaient des données plus similaires aux nôtres en ce sens qu’il y avait des taux significatifs de co-infection M genitalium chez les patients avec N à la fois. gonorrhoeae% – et C trachomatis% -%, même si le test Southern blot n’a pas été utilisé pour la détection du M genitalium Dans les populations présentant des taux élevés d’infection par les MST, les hommes qui contractent une urétrite aiguë d’un nouveau partenaire seraient plus susceptibles infecté par & gt; Par exemple, dans notre série,% des hommes atteints de gonorrhée étaient co-infectés par C trachomatis, alors que dans les régions des États-Unis où les programmes de lutte contre la chlamydia sont en place depuis un certain temps, seulement% -% devrait être Des études supplémentaires sur des populations présentant des taux élevés d’infections gonococciques et chlamydiennes endémiques utilisant des tests de transfert de Southern ou d’autres méthodes spécifiques de détection par sonde sont nécessaires pour confirmer nos résultats. En outre, l’étude de l’infection M genitalium chez les femmes La NGU dans différentes populations serait utile pour déterminer l’épidémiologie de M genitalium par rapport à d’autres agents pathogènes STDNos données ont confirmé celles récemment rapportées par Morency et al , qui suggèrent que les symptômes et les signes de l’urétrite associée au M genitalium sont plus semblables à Chlamydia urétrite que l’urétrite gonococcique Dans une comparaison des hommes infectés avec un seul agent pathogène, nous avons constaté que les deux chlamydia et M genit les hommes infectés par l’alium étaient moins susceptibles que les hommes atteints d’urétrite gonococcique de présenter une plainte de dysurie et que la décharge urétrale était moins abondante et moins susceptible d’être purulente. Cette constatation n’est pas surprenante compte tenu du fait que les premières études L’observation selon laquelle les hommes atteints d’urétrite associée au M genitalium étaient plus susceptibles d’avoir eu un partenaire avec une MST au cours des derniers jours que les hommes atteints de chlamydiose ou de gonocoques. L’urétrite présente un intérêt Les données suggèrent que M genitalium peut causer des maladies symptomatiques chez les femmes plus fréquemment que C trachomatis ou N gonorrhoeae. Ces observations nécessitent une confirmation, étant donné le petit nombre de sujets dans notre série. Un aspect unique de notre étude était l’utilisation des deux. Ecouvillons urétraux et échantillons d’urine pour la détection de l’infection à M genitalium Dix-huit hommes symptomatiques ont eu des résultats positifs Ces résultats valident l’utilisation d’échantillons d’urine pour la détection d’une infection à M genitalium dans des études épidémiologiques, bien que l’utilisation de ces deux échantillons ait modérément augmenté la sensibilité des échantillons d’urine. En conclusion, ce sont des moments passionnants pour les personnes qui s’intéressent au rôle du M genitalium dans la maladie du tractus génital. Des études récentes suggèrent que l’urétrite M genitalium ne répond pas adéquatement à la classe d’antibiotiques tétracycline ni aux quinolones . Le rôle de M genitalium dans la maladie inflammatoire des voies génitales chez les femmes est une autre question qui mérite d’être étudiée. Si le M genitalium provoque une maladie inflammatoire pelvienne ou favorise l’excrétion du VIH chez les femmes, il sera nécessaire de vérifier ces données. doivent être considérés, avec N gonorrhoeae et C trachomatis, une importante menace sexuellement transmissible pour la santé humaine