Survie du syndrome respiratoire aigu sévère Coronavirus

Contexte Les principaux modes de transmission du SRAS coronavirus SARS-CoV semblent être le contact direct de la muqueuse avec des gouttelettes infectieuses et par l’exposition à des formites. La connaissance des caractéristiques de survie du virus est essentielle pour formuler des mesures de lutte contre l’infection appropriées. La survie du virus sur différentes surfaces environnementales, y compris un formulaire de demande de laboratoire, une blouse jetable imperméable et une blouse non jetable en coton, a été étudiée. Les effets virucides de l’hypochlorite de sodium, détergent domestique, et un composé peroxygéné Virkon S; Antec International sur le virus a également été étudiéRésultats SRV-CoV GVU peut survivre pendant des jours dans les échantillons de selles diarrhéiques avec un pH alcalin, et il peut rester infectieux dans les échantillons respiratoires pour & gt; jours à température ambiante Même à des doses infectantes en culture de tissus de concentration relativement élevée / mL, le virus n’a pas pu être récupéré après séchage d’une demande de papier et son infectiosité a duré plus longtemps sur la blouse jetable que sur la blouse de coton. testé ont été montré pour être en mesure de réduire la charge virale de & gt; log in within minConclusions Les échantillons fécaux et respiratoires peuvent rester infectieux pendant une longue période à température ambiante Le risque d’infection par contact avec du papier contaminé par les gouttelettes est faible Le matériau absorbant, comme le coton, est préféré au matériau non absorbant pour les vêtements de protection individuelle soins aux patients lorsque le risque de déversement important est peu probable Le virus est facilement inactivé par les désinfectants couramment utilisés

Au début du printemps, une mystérieuse épidémie de pneumonie grave s’est produite dans le sud de la Chine et s’est rapidement répandue dans le monde entier. L’agent causal a été identifié comme un nouveau coronavirus et a été désigné comme «syndrome respiratoire aigu sévère». En décembre, un total de cas avaient été signalés, dont des décès Au total, les travailleurs de la santé étaient touchés Plus de% des patients atteints du SRAS étaient eux-mêmes des travailleurs de la santé, ce qui pourrait s’expliquer par l’excrétion unique du SRAS. -CoV, avec des charges virales atteignant un pic ~ semaines après le début de la maladie, lorsque les patients étaient hospitalisés Cette tendance à l’excrétion du SRAS-CoV met également en évidence l’importance du contrôle de la propagation nosocomiale de la maladie. Dans notre laboratoire, nous avons pu effectuer une étude de survie du virus, et des résultats partiels ont été rapportés sur l’Organisation mondiale de la Santé. Site eb sur le SRAS Nous présentons ici un rapport complet de notre étude des caractéristiques de survie du SRAS-CoV dans différentes matrices d’échantillons cliniques, ainsi que sur diverses surfaces environnementales en laboratoire et à l’hôpital. Le risque d’acquisition du SARS-CoV Nous rapportons également l’effet virucide des désinfectants liquides communs sur le CoV-SRAS

Matériaux et méthodes

L’échantillon D était un échantillon de selles diarrhéiques provenant d’une suspension adulte A% de chaque échantillon de selles a été préparé dans du PBS pH. Après centrifugation à g pendant min, le surnageant a été recueilli et le pH a été vérifié avec du papier pH. avait un pH de -, l’échantillon B avait un pH de -, l’échantillon C avait un pH de, et l’échantillon D avait un pH de A total de mL de chaque suspension de selles a été enrichi avec des mL de stock de virus GVU TCID / mL contrôle, mL de milieu de transport viral a également été dopé avec mL du stock de virus Les échantillons ont été incubés dans des conteneurs fermés à température ambiante ° C pendant h, h, h, h, jour, jours, jours, jours, jours et jours. Des dilutions d’une autre suspension de selles et d’un contrôle ont été préparées dans le diluant d’Earl. Cinquante microlitres de chaque dilution ont été inoculés dans les puits d’une plaque bien. Cent microlitres de cellules Vero E / ml ont été ajoutés à chaque puits et les incubé à ° C en% CO pendant plusieurs jours en TCID / μL pour chaque suspension de selles à un temps différent a été calculé sur la base de la méthode de Kärber L’expérience a été répétée en utilisant un vaccin trivalent contre le poliovirus pour comparer l’effet du pH sur un virus non encapsulé. échantillons respiratoires Un total de mL de stock de virus GVU TCID / mL a été ajouté à mL d’un échantillon nasopharyngé de NPA, d’échantillons TNS de gorge et d’écouvillon nasal et de milieu de transport viral comme témoin. Les échantillons respiratoires ont été jugés négatifs pour les virus respiratoires Ils ont ensuite été incubés dans des récipients fermés à température ambiante ou à ° C pendant h, h, et,,,, et jours. La concentration virale TCID / μL pour chaque échantillon à différents moments a été déterminée comme ci-dessusSurvival of SARS-CoV sur papier, Robes jetables imperméables, et blouses non jetables de coton Pour simuler l’événement de grandes gouttelettes qui contiennent le SRAS-CoV tombant sur le papier et sur le coton et les blouses jetables, des expériences ont été exécutées pour Déterminer si le SRAS-CoV a survécu sur ces surfacesPapier Un formulaire de demande de laboratoire papier a été découpé en petits morceaux, × cm, qui ont été stérilisés à l’autoclave à ° C pour le virus Stock GVU TCID / mL a été dilué en série à TCID / mL avec PBS. chaque dilution de virus, μL a été appliquée à la surface de chaque morceau de papier stérilisé. On a laissé l’échantillon être absorbé à température ambiante et les morceaux de papier ont été laissés reposer pendant différentes durées min, h, h, h, h, jour, et jours Chaque feuille de papier a ensuite été placée dans un tube de culture cellulaire Vero E. Pour chaque dilution de virus et à différents intervalles après absorption, des morceaux de papier ont été inoculés dans des tubes de culture cellulaire. Tous les tubes ont été incubés à ° C Le papier stérilisé sans suspension de virus a également été inclus dans l’étude pour vérifier toute toxicité à la culture de cellules. Robe jetable Pour la robe jetable, tout le processus utilisé pour le papier a été répété, sauf qu’une robe jetable était La robe fait partie de l’équipement de protection personnelle utilisé dans notre laboratoire lors de la manipulation d’échantillons potentiellement contaminés par le CoV-SRAS Elle est faite de polypropylène g / m recouvert d’un film de polyéthylène g / m, et la taille et le cou sont attachés lorsque la robe est utilisée pour fournir une protection complète du corps robe de coton Pour tester la robe de coton, un grand morceau de tissu coupé d’un manteau de laboratoire de coton ordinaire a été trempé dans l’eau distillée pendant la nuit et bouilli pour h L’ensemble du processus a été répété fois pour enlever les résidus chimiques qui ont été jugés toxiques pour la culture cellulaire Après séchage, le tissu a été coupé en petites pièces, × cm Les pièces ont ensuite été stérilisées par autoclavage Le tissu de coton stérilisé était alors testé de la manière utilisée pour le papier et la robe jetableEffet de différents désinfectants et détergents sur la survie de SARS-CoV Différentes dilutions de sol d’hypochlorite de sodium ution: et: de la solution mère, qui contient, ppm de chlore actif; un détergent domestique contenant du lauryl éther sulfate de sodium, des alkylpolyglycosides et du diéthanolamide d’acide gras et de coco: et; Marque AX; et Virkon S%; Antec International a été fabriqué par dilution avec de l’eau distillée Cinquante microlitres de virus stock GVU TCID / mL ont été ajoutés à des dilutions différentes de la solution d’hypochlorite, du détergent ménager et du Virkon S et au milieu de transport viral comme témoin. min, min, min et min, des dilutions en série de différents désinfectants ou témoins ont été effectuées dans le diluant d’Earl. Cinquante microlitres de chaque dilution de virus ont été ajoutés à chacun des puits d’une plaque. Un total de μL de MEM a été ajouté à chaque Après avoir ajouté μL de cellules Vero E dans chaque puits, les plaques ont été scellées et incubées à ° C dans un incubateur de% CO. Un effet cytopathogène a été enregistré le jour et la TCID virale résiduelle a été calculée à partir des puits sans toxicité cellulaire.

Résultats

La survie du SRAS-CoV dans différents spécimens de selles montre la durée de survie du SRAS-CoV après incubation dans des échantillons de selles à différents pH Le virus n’était pas récupérable dans les jours après incubation dans des échantillons normaux de selles adultes ou après incubation un pH légèrement acide Cependant, le virus a survécu pendant des jours dans un échantillon de selles diarrhéiques avec un pH de Poliovirus qui n’a pas montré ces caractéristiques de survie Poliovirus dopé dans le même spécimen de selles de bébé a survécu pour & gt; La durée de survie du SRAS-CoV dans la suspension de selles a été testée à nouveau dans d’autres échantillons de selles diarrhéiques, avec les mêmes résultats non montrés.

Figure View largeTélécharger la lameSurveillance du syndrome respiratoire aigu sévère coronavirus dans différents échantillons de selles à température ambiante VTM, milieu de transport viralFigure Voir grandDownload slideDurée de récupération du syndrome respiratoire aigu sévère coronavirus dans différents échantillons de selles à température ambiante VTM, milieu de transport viralSurvival du SARS-CoV dans Différents échantillons respiratoires Le virus peut rester vivant dans des échantillons respiratoires, tels que des échantillons NPA ou TNS, pour & gt; jours à température ambiante et pour & gt; jours à ° C

Figure View largeTélécharger la lameSurveillance du syndrome respiratoire aigu sévère coronavirus dans l’aspiration nasopharyngée Échantillons de NPA, prélèvements nasaux de gorge et écouvillon nasal TNT ou milieu de transport viral VTM à température ambiante RT et à ° CFigure Voir en grandDoublure de téléchargement du syndrome respiratoire aigu sévère coronavirus dans l’aspiration nasopharyngée Les échantillons de NPA, les échantillons TNS de gorge et d’écouvillon nasal, ou le milieu de transport viral VTM à température ambiante RT et à ° CSurvival de SARS-CoV sur papier, la blouse jetable imperméable et la table de toilette non jetable indiquent la durée de survie pour SRAS-CoV sur Différents matériaux Même avec une charge virale relativement élevée dans la gouttelette, une perte rapide d’infectiosité a été observée pour le papier et le coton. Inactivation sur surface imperméable dure beaucoup plus longtemps Aucune toxicité de culture cellulaire n’a été observée pour le papier, blouse jetable ou coton non jetable

Tableau View largeDownload slideDurée de survie du syndrome respiratoire aigu sévère coronavirus SARS-CoV sur papier, une blouse jetable, et une robe de cotonTable View largeDownload slideDuration de la survie du syndrome respiratoire aigu sévère coronavirus SARS-CoV sur papier, une robe jetable, et un coton Effet de différents désinfectants et détergents sur le SRAS-CoV Après incubation avec divers désinfectants, une réduction de la charge virale de & gt; log a été prise pour indiquer la table d’inactivation Tous les désinfectants ont réduit la charge virale de & gt; log in within min after incubation Une toxicité cellulaire a été observée dans les puits inoculés avec un mélange virus / désinfectant à une: dilution Ainsi, en essayant de calculer la TCID résiduelle, les résultats des puits avec des dilutions à partir de: ont été utilisés

Tableau View largeTélécharger slideÉffet des désinfectants sur le syndrome respiratoire aigu sévère coronavirusTable View largeTarticle de téléchargementEffet des désinfectants sur le syndrome respiratoire aigu sévère coronavirus

Discussion

Cela peut expliquer les éclosions d’Amoy Gardens, où le système de drainage et d’égout a contribué à faciliter la propagation du SRAS, comme l’a souligné l’étude du Comité d’experts sur le SRAS et Dans une étude de simulation par Yu et al Sur la base des données quantitatives obtenues de notre propre étude , les échantillons de selles contiennent une charge virale beaucoup plus élevée que les échantillons de NPA La concentration moyenne du virus peut atteindre TCID / mL quelques semaines après le début de la Les données actuelles montrent qu’à une forte concentration de TCID / mL de virus, le SRAS-CoV peut survivre pendant des jours à température ambiante dans des échantillons de selles respiratoires et diarrhéiques. En ce qui concerne le contrôle des infections par le SRAS, il est important de savoir que les excréta des patients atteints du SRAS, en particulier ceux qui souffrent de diarrhée, peuvent rester très infectieux pendant une période considérablement longue et que des précautions appropriées doivent être prises. pour prévenir la formation d’aérosols, en raison de la transmission probable du SRAS par voie aérienne. En raison de l’épidémie de SRAS, la contamination des documents papier préoccupait les travailleurs de la santé, qui devaient souvent manipuler de tels documents dans leur travail quotidien. volume des gouttelettes respiratoires, μL; rayon, ~ mm qui contiennent le virus tombent sur le papier Même avec une concentration plus élevée de TCID / mL de virus que ce qui se produit normalement dans les échantillons de NPA TCID / mL, aucun infectiosité virale ne subsiste après le séchage du papier Papier contaminé avec une concentration plus élevée d’équivalent viral à celle des excréments fécaux [c.-à-d. TCID / mL] n’était pas infectieuse après h, et aucune infectivité virale n’a été montrée après h, même avec une concentration de TCID / mL Notre étude montre que le risque d’infection par contact avec une gouttelette contaminée Le papier est petit Les mesures standard de contrôle des infections, comme le lavage des mains après avoir touché tout matériel infectieux potentiel, sont efficaces contre la transmission nosocomiale du SRAS Une étude antérieure a montré que les coronavirus E et OC peuvent survivre quelques heures après séchage sur différentes surfaces. , les éponges de gaze de coton et les gants de latex Dans la présente étude, nous avons comparé la survie du SRAS-CoV sur des types de blouses: blouses jetables et blouses de coton. à, même avec une forte concentration de virus TCID / mL, les gouttelettes perdront tout leur pouvoir infectant après l’application sur l’étoffe, comparé à l’h nécessaire pour la robe jetable. Apparemment, les gouttelettes seront absorbées plus rapidement sur le matériau de coton les données actuelles montrent qu’une simple blouse de coton offre une protection raisonnable contre les petites gouttelettes contenant le CoV-SRAS Notre étude soulève également la possibilité que les gouttelettes qui pendent sur une blouse jetable non absorbante risquent de contaminer l’environnement lorsque les travailleurs de la santé portent la robe. Une conclusion similaire peut également être tirée pour les gants, bien que les gants n’aient pas été testés dans la présente étude. Un vêtement jetable spécialement conçu avec une plastification hydrofuge avec une feuille externe absorbant les liquides peut être utilisé. offrir une meilleure protection pour le personnelEnfin, notre étude montre que les détergents / désinfectants liquides communs sont tout aussi efficaces contre le SRAS-Co V Tous ont démontré une réduction minimale du titre viral initial en min après incubation en solution Les détergents ménagers testés dans cette étude se sont révélés efficaces contre le SRAS-CoV avec une enveloppe lipidique et pourraient être utilisés pour nettoyer des éléments communs et surfaces qui ne sont pas fortement contaminées par des sécrétions ou des excrétas Bien que nous n’ayons pas effectué d’étapes de neutralisation spécifiques pour les détergents / désinfectants, le fait que les puits que nous avons examinés pour calculer le TCID du virus résiduel soient exempts de toxicité cellulaire suggère fortement que les désinfectants non neutralisés aucun effet sur le virus pendant les jours d’incubationLe virus du SRAS-CoV est un virus récemment découvert Jusqu’ici, il n’y a eu que quelques rapports sur ses caractéristiques de survie . Nous démontrons que ce virus mortel peut rester infectieux pendant une longue période. échantillons de selles Les échantillons que nous avons enrichis de SRAS-CoV ont été incubés dans des récipients fermés pendant toute la période d’incubation, s Ainsi, nos résultats ont montré que, dans cette situation, les gouttelettes peuvent être un problème de transmission de la maladie, comme cela a été le cas dans les foyers Amoy Gardens. Cela a des implications importantes pour le traitement des eaux usées domestiques et hospitalières Heureusement, ce virus est également susceptible de sécher. Nous avons montré que lorsque des gouttelettes contenant du virus étaient séchées, le virus était rapidement inactivé sur papier et tissu de coton. La transmission par des gouttelettes de papier et des blouses de coton est improbable et les détergents domestiques peuvent être efficaces. agents de décontamination à utiliser en laboratoire et à l’hôpital

Remerciements

Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits