Une initiation précoce de la thérapie antirétrovirale combinée chez les nouveau-nés infectés par le VIH peut aboutir à une suppression virologique soutenue avec une faible fréquence de cellules CD T véhiculant le VIH dans le sang périphérique

Nous avons étudié une cohorte d’enfants initiés aux doses thérapeutiques du traitement antirétroviral combiné dans les heures qui ont suivi la naissance la sexualité de la femme. Chez les enfants ayant obtenu une suppression virologique soutenue, les mesures de la taille du réservoir dans le sang périphérique étaient très faibles

Contexte Un enfant infecté par le VIH de type immunodéficience humaine a commencé un traitement antirétroviral combiné. Le cART à des heures de vie a récemment rapporté n’avoir aucune virémie plasmatique détectable après l’arrêt du TARa. L’étude actuelle a étudié l’impact de l’initiation précoce de la TARV sur la taille du réservoir. Méthodes Les enfants nés de mères infectées par le VIH et ayant débuté le TARV dans les heures qui ont suivi leur naissance dans les centres canadiens ont reçu une sérologie VIH, des réponses immunitaires à médiation cellulaire spécifiques au VIH, une virémie plasmatique, des L’ADN du VIH et l’ARN, la présence de génotypes VIH et HLA compétents pour la réplication ont été déterminés pour les enfants infectés par le VIH avec suppression virologique soutenue. Résultats des enfants traités par cART, infectés verticalement% Chez les patients ayant une suppression virologique soutenue, sérologie VIH, Les réponses immunitaires à médiation cellulaire spécifiques au VIH Gag, Nef, et la charge virale ultrasensible étaient néga L’ADN du VIH n’a pas été détecté dans les lymphocytes T CD enrichis des enfants. copies / CD T cells, alors que HIV-RNA a été détecté – copies / μg ARN Aucun ARN-VIH associé au virion n’a été détecté suite à la stimulation mitogène des cellules T CD du sang périphérique – million de cellules T CD chez ces enfants, mais le virus compétent pour la réplication a été détecté Par co-culture quantitative impliquant un plus grand nombre de cellules chez des enfants testés unités infectieuses / cellules T CDConclusions Chez les nouveau-nés infectés par le VIH périnatale, l’initiation du TARV dans les heures de naissance peut réduire considérablement la taille des réservoirs VIH. être nécessaire de déterminer si une guérison fonctionnelle du VIH peut être obtenue chez ces enfants

enfant, association traitement antirétroviral, éradication, VIH, proviral DNAA virus de l ‘immunodéficience humaine type Infection par le VIH “bébé Mississippi” dépourvu de virémie VIH détectable après arrêt du traitement et chez qui la thérapie antirétrovirale triple combinaison cART a été instaurée aux heures de la vie a récemment été rapporté par Persaud et al Bien qu’un suivi à long terme sera nécessaire pour déterminer si le VIH a été éradiqué chez cet enfant, ce cas soulève la possibilité qu’une initiation très précoce de la TARV puisse empêcher l’établissement de réservoirs de VIH ou limiter la taille du réservoir suffisamment pour permettre une suppression virologique à long terme après l’arrêt du traitement Une suppression virologique à long terme après interruption du TARa a déjà été observée dans une sous-population d’adultes ayant commencé le traitement tôt durant l’infection primaire au VIH. facteurs de l’hôte, tels que le génotype HLA de l’antigène leucocytaire humain, peuvent également avoir une incidence sur Dans nos établissements de soins tertiaires pédiatriques, le TART à doses thérapeutiques est utilisé de façon routinière comme prophylaxie périnatale post-exposition VIH depuis de nombreuses années dans des situations à haut risque. Cette approche est utilisée pour les nourrissons nés de mères infectées par le VIH avec suppression virologique incomplète. à l’accouchement ou, en l’absence de résultats de charge virale, si leur mère ne prenait pas de médicaments antirétroviraux. La thérapie néonatale est instaurée le plus tôt possible après la naissance et au plus tard en heures de vie. Dans ce rapport, nous décrivons une cohorte de nourrissons exposés au VIH qui ont été initiés à la TARa dans les heures suivant leur naissance, le taux de transmission verticale dans ce contexte et les résultats virologiques et immunologiques dans un sous-groupe de nourrissons ayant atteint suppression virologique

Méthodes

Les enfants exposés au VIH étaient admissibles à cette étude s’ils recevaient des doses thérapeutiques de TARV dans les heures suivant la naissance en raison d’une suppression virologique maternelle incomplète à l’accouchement ou, en l’absence de résultats de charge virale maternelle, d’antécédents maternels d’adhérence incomplète ou de non-observance. à la thérapie antirétrovirale Les sujets ont été identifiés à partir des bases de données cliniques des établissements de soins pédiatriques participant au VIH: The Hospital for Sick Children, Toronto; Hôpital pour enfants de l’est de l’Ontario, Ottawa; Centre Hospitalier Universitaire Sainte-Justine, Montréal L’étude a été approuvée par le comité d’éthique de la recherche de chaque établissement. Les données cliniques et démographiques sur les mères et les nourrissons ont été recueillies rétrospectivement Enfants confirmés infectés par le VIH selon des critères standards. suppression virologique soutenue avec TART ont été approchés pour la participation à l’étude; après l’obtention du consentement éclairé, des tests prospectifs ont été entrepris pour vérifier la présence de VIH résiduel. La suppression virologique soutenue a été définie par l’absence de tout virus détectable dans les tests de charge virale standard après l’obtention d’une charge virale indétectable. copies / ml pour la première fois Le test sérologique VIH a été réalisé par dosage immuno-enzymatique standard ELISA et Western blot dosages La virémie plasmatique a été déterminée en utilisant le test VERSANT HIV-ramifié DNA Bayer Corporation, Berkeley, Californie; des copies de limite de détection / mL avant octobre et après en utilisant Abbott RealTime HIV-assay Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois; limite de détection copies / mL Virémie plasmatique résiduelle & lt; copies / mL a été déterminée par un test VIH Cobas AmpliPrep / Cobas TaqMan modifié comme décrit précédemment En bref, pour déterminer la limite de détection du test, VIH-ARN du VIH- Virology Quality Assurance Laboratory RNA Quantification Standard a été dilué en série Les échantillons ont été soumis à des copies de l’ARN du VIH par millilitre de plasma. Les échantillons cliniques ont été soumis à COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan Version du test VIH Roche Diagnostics en plasma quadruple × mL Le taux d’ADN du VIH associé aux cellules dans les lymphocytes T CD a été déterminé par PCR en temps réel par PCR comme décrit précédemment Pour déterminer le taux d’ARN du VIH associé aux cellules, l’ARN total a été isolé à partir de cellules T CD hautement enrichies en utilisant RNeasy Mini Kit Qiagen suivi d’un traitement à la DNase Qiagen Ensuite, le μg d’ARN total a été soumis à la Co Bas Le test AmpliPrep / Cobas TaqMan VIH en double Le système de test contient un ARN armé standard de quantification du VIH, qui a été ajouté à chaque échantillon pour compenser les effets de l’inhibition et pour contrôler l’efficacité de la détection de la ciblePour évaluer la présence de cellules porteurs de virus capables de réplication, les lymphocytes T CD purifiés ont été stimulés par l’analogue mitogène de la prostratine pendant plusieurs jours et le taux d’ARN du VIH associé au virion dans le surnageant de culture a été quantifié Le surnageant a été récolté plusieurs jours après stimulation mitogène. HIV-RNA en raison du moment de la stimulation maximale des lymphocytes T CD et des effets cytopathogènes et l’impact associé des cellules mourantes Chez les enfants plus âgés, la présence de virus compétent pour la réplication a également été testée par co-culture quantitative standard du sang périphérique. cellules comme décrit précédemment A ce jour, la co-culture quantitative a été différée pour les jeunes enfants en raison du volume sanguin c Les contraintes pour la recherche des réponses des lymphocytes T spécifiques à Gag et Nef, mesurées par ELISpot enzyme-linked immunospot, ont été réalisées selon le protocole du fabricant Mabtech AB, Suède comme décrit précédemment Puis, μg / mL de chaque peptide antigène clade B consensus Un programme de réactif VIH-Gag et / ou Nef ou CMV-pp [National Institutes of Health AIDS] a été ajouté aux puits appropriés Un microgramme par millilitre d’entérotoxine B staphylococcique a été utilisé comme témoin positif, tandis que le diméthylsulfoxyde DMSO, le DMSO le plus élevé concentration utilisée dans les stimulations peptidiques, servait de témoin négatif et les génotypes HLA ont été déterminés en utilisant la PCR et le séquençage d’ADN comme décrit précédemment La séquence d’acides aminés déduite de la région HLA-B a été examinée, et les substitutions associées au contrôle de point de consigne virologique ont été identifiés

RÉSULTATS

t; copies / mL & lt; copies / mL & lt; copies / mL & lt; copies / mL ADN associé aux cellules & lt; copies / CD T cells & lt; copies / CD T cells & lt; copies / CD T cells & lt; Copies / CD T cellules Copies RNAd associées aux cellules / μg Copies d’ARN / μg Copies d’ARN / μg Copies d’ARN / μg ARN ARN dans la culture de cellules T CD stimulées Non détectée M Non détectée M Non détectée M Non détectée M CD quantitative T co-culturef Non détecté UI / lymphocytes T CD Non terminé Non terminé Cas Cas a Cas a Âge / Sexe y / F y / F y / F y / M Typage HLA A * – A *; B * – B *; C * – C * A * – A *; B * – B *; C * – C * A * – A *; B * – B *; C * – C * A * – A *; B * – B *; C * – C * HLA-B variationb CM; K / S; R / T S; N; R Y / M; Q / S; R / T Y / M; Q / S; Etat R / T CCR- Δ Type sauvage Type sauvage Type sauvage Type sauvage Moyenne CD Nombre de cellules T% de cellules de l’année / μL% de cellules / μL% de cellules / μL de cellules / μL% Sérologie ELISA Négatif Négatif Négatif Négatif Western blot Négatif Négatif Négatif Négatif T-réponses cellulaires VIH-Gag Indétectable Indétectable Indétectable Indectable VIH-Nef Indétectable Indétectable Indétectable Indectable Plasma viremiac & lt; copies / mL & lt; copies / mL & lt; copies / mL & lt; copies / mL ADN associé aux cellules & lt; copies / CD T cells & lt; copies / CD T cells & lt; copies / CD T cells & lt; Copies / CD T cellules Copies RNAd associées aux cellules / μg Copies d’ARN / μg Copies d’ARN / μg Copies d’ARN / μg ARN ARN dans la culture de cellules T CD stimulées Non détectée M Non détectée M Non détectée M Non détectée M CD quantitative T co-culturef Non détecté UI / lymphocytes T CD Non terminé Non terminé Abréviations: ELISA, dosage immuno-enzymatique; Le VIH, le type de virus de l’immunodéficience humaine; HLA, antigène leucocytaire humain; UI, unités infectieuses; M, milliona jumeaux non-identiques; la contamination d’un jumeau à l’autre n’était pas possible car leurs prises de sang ont été effectuées à des jours différents et le typage HLA a été effectué à des jours différents avec des douzaines d’autres échantillons individuels testés dans la variation HLA-B entre les positions associées à un meilleur contrôle virologique. point; les substitutions spécifiques d’acides aminés sont indiquées en grasc Limite de détection: copies / mL; chaque dosage effectué sur mL de sang total. Limite de détection: μg d’ARN; réalisée en double exemplaire Limite de détection: copies / mL; M dénote des millions de cellulesf Mesuré comme unité infectieuse par million de cellules T CD; Les réponses IFN-γ significatives sur le cytomégalovirus ont été mesurées dans tous les cas. View largeTélécharger DiapositiveInterféron-gamma IFN-γ immunospot-enzyme ELISpot dosé chez les enfants Les cas analysés ne présentaient pas de virus T détectables par le virus de l’immunodéficience humaine de type VIH-Gag ou Nef dans leurs cellules mononucléaires du sang périphérique PBMCs A, HIV-Gag et les réponses Nef ont été criblées en utilisant un test ELISpot IFN-y. Des unités formant des spots par million de PBMC sont rapportées après stimulation avec le pool de peptides de l’antigène correspondant testé à pg / ml / peptide ∧ Représente des réponses caractérisées par une augmentation par rapport au non. traitement DMSO condition B, puits ELISpot représentatif pour le cas sont présentés Chaque expérience a été réalisée en double Abréviations: CMV, cytomégalovirus; DMSO, diméthylsulfoxyde; Le VIH, le type de virus de l’immunodéficience humaine; NT, pas de traitement; Les PBMC, les cellules mononucléées du sang périphérique; SEB, entérotoxine B staphylococcique; SFU, unités de formation de tachesFigure View largeTélécharger DiapositiveInterféron-gamma IFN-γ immunospot enzymatique ELISpot pour les enfants Les cas analysés ne présentaient pas de lymphocytes T spécifiques à la protéine VIH-Gag ou Nef du virus de l’immunodéficience humaine détectable dans leurs cellules mononucléaires du sang périphérique Les réponses PBMC A, HIV-Gag et Nef ont été criblées en utilisant un test ELISpot IFN-y. Des unités formant des spots par million de PBMC sont rapportées après stimulation avec le pool de peptides de l’antigène correspondant testé à μg / mL / peptide ∧ Représente des réponses caractérisées par & gt; augmentation de la multiplication par rapport à la condition DMSO sans traitement B, les puits représentatifs ELISpot pour le cas sont présentés Chaque expérience a été réalisée en double Abréviations: CMV, cytomégalovirus; DMSO, diméthylsulfoxyde; Le VIH, le type de virus de l’immunodéficience humaine; NT, pas de traitement; Les PBMC, les cellules mononucléées du sang périphérique; SEB, entérotoxine B staphylococcique; SFU, unités de formation ponctuelleTous les enfants ayant une suppression virologique soutenue étaient homozygotes pour le CCR de type sauvage Trois des enfants présentaient des variations de séquence HLA B * et HLA-B auparavant associées à un meilleur contrôle du VIH Tableau Les enfants traités précocement qui avaient une infection virologique rebond dû à une mauvaise adhérence après plusieurs années de traitement efficace et une suppression virologique constante mais non soutenue étaient homozygotes pour CCR de type sauvage; ni HLA B * B * -B *, B * -B *, mais les deux avaient des mutations potentiellement bénéfiques en gras aux positions C / F et C / Y et N / S et S / W de HLA-B respectivement

DISCUSSION

L’importance des niveaux détectables d’ARN du VIH associés à la cellule dans le sang périphérique, en même temps que l’absence d’ARN du VIH associé au virion détectable dans les cellules CD T des enfants suite à une stimulation mitogénique dans le nombre limité de Les cellules T CD testées sont incertaines Les premières peuvent refléter la transcription d’un génome VIH défectueux, une théorie avancée pour expliquer des résultats similaires chez le «patient berlinois» et le «bébé Mississippi» Bien que nous ayons démontré un faible niveau de réplication … virus compétent détecté en co-culture quantitative chez l’enfant unique, il est également possible qu’un virus compétent pour la réplication soit présent dans les échantillons de sang périphérique des patients restants mais non détecté en raison du fait que nous n’avons pas pu obtenir suffisamment de exemple, & gt; millions de PBMC Une autre explication potentielle est l’échec de l’induction de la réplication du provirus in vitro. Dans une étude récente, il a été montré que% de virions non induits avaient des génomes intacts et une fonction de répétition terminale normale . la progression de la maladie , et les acides aminés individuels dans le HLA-B ont été associés à influencer le VIH-set-point viral Parmi les enfants de notre cohorte avec suppression virologique soutenue, avaient des marqueurs protecteurs, y compris HLA B * et HLA -B variations de séquence aux positions,, et Un de ces enfants avait également l’allèle protecteur HLA B * L’enfant chez qui le virus compétent pour la réplication a été récupéré par co-culture quantitative manquait ces marqueurs génétiques protecteurs cas Les enfants qui avaient virologique rebond dû à une mauvaise adhérence après plusieurs années de traitement efficace et une suppression virologique régulière mais non soutenue n’a pas eu HLA B *, mais on a eu HLA B *, et les deux avaient [Nos résultats suggèrent une contribution potentielle du système immunitaire du nourrisson ou peut-être de la mère vers un contrôle virologique chez les enfants infectés périnataux précocement. Chez les nourrissons exposés au VIH et à risque élevé ayant reçu le TARV dans les heures de naissance en raison d’un traitement antirétroviral maternel insuffisant ou inadéquat ont été infectés, un taux de transmission verticale de%, ce qui contraste avec le% de taux de transmission global observé au Canada lorsque le TART maternel est initié & gt; semaines avant l’accouchement En outre, chez les enfants% testés dans les heures suivant la naissance, des résultats positifs au VIH-PCR suggèrent une transmission in utero Ces données renforcent l’importance du diagnostic maternel opportun et de la mise en place d’un TARV anténatal approprié. réduirait le risque de transmission verticale à & lt;% et évite le besoin de mesures prophylactiques agressives telles que le traitement du nouveau-né avec cARTBasé sur les résultats d’un essai clinique randomisé, le Département américain de la Santé et des Services humains recommande actuellement la zidovudine orale pour les premières semaines de la vie en combinaison avec des doses de névirapine par voie orale pendant la première semaine pour les nourrissons de mères présentant une suppression virologique incomplète Les inconvénients potentiels de cette stratégie sont -fold Si l’enfant est infecté, la résistance à la névirapine peut se développer en% des enfants suivant une dose unique de périnatum névirapine De plus, si infectée, cette dose prophylactique Un traitement antirétroviral combiné à des doses thérapeutiques pourrait potentiellement annuler ces risques et moduler l’établissement et la persistance de réservoirs de VIH Nous préconisons donc que les TART à des doses thérapeutiques soient recommandés pour les nouveau-nés de mères ayant un réplication contrôlée du VIH au moment de l’accouchement Des études formelles évaluant la pharmacocinétique des antirétroviraux et l’innocuité du TARa chez les nouveau-nés sont en cours et d’une importance capitale à cet égard. En conclusion, les résultats chez les enfants présentant une suppression virologique prolongée montrent Le TARc chez les nourrissons peut réduire considérablement le taux d’ADN proviral VIH-ADN et de virus compétents pour la réplication dans les cellules T CD CD du sang périphérique. Étant donné qu’il est impossible d’examiner chaque cellule de chaque nourrisson, une interruption structurée du traitement peut être le seul moyen pratique de déterminer si l’éradication du VIH ou la guérison fonctionnelle peuvent être Cependant, l’interruption du traitement n’est pas sans risque, car un contrôle virologique incomplet après la réinitiation du traitement et le développement d’une résistance aux antirétroviraux a été observé chez les adultes En outre, si le rebond virologique devait survenir après l’arrêt cART, En conséquence, une discussion approfondie des risques et des avantages de l’arrêt du TARV avec les patients et les soignants est impérative et, si elle est entreprise, nécessitera des soins intensifs et à long terme. suivi à terme

Remarques

Remerciements Nous remercions le Dr Paul Wender d’avoir fourni l’analogue de la prostratine et les volontaires de l’étude et leurs aidants pour leur participation à cette étude. Le soutien financier HS a été soutenu par une subvention d’infrastructure du Réseau SIDA et MI, Conflits d’intérêts potentiels. auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués